中文摘要：

分离多种小鼠胚胎干细胞（ES）并分别与具有不同遗传背景的小鼠四倍体胚胎聚合，将聚合胚胎移植假孕小鼠子宫或输卵管，获得完全由ES细胞发育而来的小鼠，即ES小鼠，成年ES小鼠与普通小鼠没有外观差异，具有正常的生殖能力。通过DNA微卫星分析，ES小鼠完全由ES细胞发育而来，四倍体胚胎只参与胚外组织的生成。四倍体胚胎和ES细胞的遗传背景的杂合度以及聚合时双方的细胞数目和比例是影响ES小鼠制备的关键因素。由杂交遗传背景的四倍体胚胎和ES细胞更易获得ES小鼠，此外，ES细胞的生长状态、传代次数、冷冻保存、聚合培养基、体外培养环境、胚胎移植和分娩方式、继母母性等都影响制备ES小鼠的效率。呼吸衰竭征是ES小鼠出生后死亡的主要因素，其肺表面活性蛋白B表达显著减少。利用甲基化敏感性限制性内切酶-PCR技术分析表明，发育至成年的ES小鼠其印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与正常成年对照小鼠之间没有差异，而新生死亡的ES小鼠和ES细胞中印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与对照组相比则存在明显差异。通过本项目研究，建立了高效、快捷、简便的ES小鼠制备技术，为研究基因功能和构建人类疾病模型小鼠提供了重要途径。