本课题主要研究了电喷雾质谱(ESI-MS)法对蛋白质-配体分子非共价键复合物的分析和检测。具体包括以下几方面工作1)利用分子生物学的方法高效表达和纯化了GABABR1-VFR融合蛋白,并用电喷雾质谱(ESI-MS)对其进行了检测;2)构建了GABABR1活性探针和配体亲和层析方法分离提取活性GABABR1-VFT融合蛋白;3)探索了实验条件、离子源等参数对ESI-MS检测蛋白质-配体分子非共价键复合物的影响,4)运用ESI-MS结合CD和荧光光谱分析,观测蛋白质非共价键复合物及其解离过程,并对蛋白质的构象变化及其复合物的解离机理进行阐释;5)建立了ESI-MS定量计算法测定蛋白质复合物的分解反应速率常数(Kd);6)通过ESI-MS研究特定结构的模型配体分子与蛋白质结合的对照实验,推测和阐释蛋白质与药物配体分子的相互作用方式和规律。上述工作为运用ESI-MS方法为寻找以特定蛋白为靶点的潜在药物分子提供了的实验基础和理论依据。
英文主题词ESI-MS; GABAB1-VFT; non-covalent protein complexes