卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,靶向治疗作为一种新的肿瘤治疗手段,是高效利用现有药物和改善化疗药物疗效的一种有效途径。我们前期工作,首次筛选出卵巢癌细胞的特异性结合肽(OSTP-1),并将其与紫杉醇进行耦连,获得特异性紫杉肽类耦连物(PTX-P)。体外实验证实它具有与紫杉醇相同的抗卵巢癌效果。本项目将进一步运用卵巢癌裸鼠移植瘤模型及卵巢癌患者手术切除标本验证特异性结合肽的定位、分布及靶向效果;检测PTX-P对卵巢癌细胞株的抗癌活性,并采用卵巢癌裸鼠移植瘤模型进行体内抗癌治疗实验,证实PTX-P的靶向疗效;进行PTX-P在荷瘤裸小鼠体内的药代动力学研究,为后续的临床用药研究提供依据。本项目的实施有望建立有效的卵巢癌靶向治疗的新方法,具有很好的应用前景;为卵巢癌及其它人体肿瘤的治疗提供崭新的思路和有效的探索。
OSTP peptide;ovarian cancer cells A2780;targeted therapy;paclitaxel;cells apoptosis
卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,靶向治疗作为一种新的肿瘤治疗手段,是高效利用现有药物和改善化疗药物疗效的一种有效途径。我们前期工作,首次利用噬菌体展示技术筛选出卵巢癌细胞的特异性结合肽(OSTP)。本项目进一步研究了OSTP的靶向性及定位分布情况。结果1.成功合成和标记5-FAM-OSTP。5-FAM-OSTP孵育后的卵巢癌A2780细胞产生较明亮的黄绿色荧光,胞膜明显。而对照组SGC7901、MG63细胞不产生荧光。2.裸鼠体内实验结果显示5-FAM-OSTP在各组织的荧光信号强度不同,肿瘤组织可见强荧光信号,平均荧光强度为17.656±1.980;肝组织平均荧光强度 4.277±0.291;肾组织平均荧光强度 4.422±0.767;其他脏器均无可见荧光信号。肿瘤组织与肝、肾组织的荧光强度差异有显著性(P<0.05)。3.5-FAM-OSTP与人体卵巢癌组织结合作用较强,在卵巢浆液性癌、粘液性癌胞膜和胞浆可见较强荧光信号,以胞膜明显;而与卵巢良性肿瘤和卵巢正常组织结合作用较弱;5-FAM-OSTP与同患者的对照组织子宫内膜与肌壁无结合作用。通过体外及动物实验证实了5-FAM-OSTP对卵巢癌A2780细胞具有特异结合作用,通过人体组织标本的检测证明其对人体组织有一定的特异性。研究OSTP联合紫杉醇对卵巢癌A2780细胞生长和凋亡的影响及其机制。结果OSTP和紫杉醇联合应用,结果发现细胞凋亡率分别是39.40%、53.09%、48.18%和45.62%,均高于OSTP和紫杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值,且差异有统计学意义(P<0.001),提示OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用。动物实验也证实了OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的作用。磷酸化蛋白芯片检测OSTP联合紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡中蛋白磷酸化水平的情况。共筛选出42个差异磷酸化位点,31个差异蛋白。其中有11个蛋白的磷酸化水平上调,23个蛋白的磷酸化水平下调。Western Blot进一步研究了其中PI3K/AKT信号通路的两个差异磷酸化蛋白(FoxO1/3/4、14-3-3zeta/delta)的表达情况,结果显示,与OSTP组、紫杉醇组相比,联合用药组中的FoxO1/3/4磷酸化蛋白表达水平降低(P<0.01),差异均具有统计学意义。与OSTP组、紫杉