中文摘要：

目的构建并鉴定牛乳铁蛋白抗菌-乳源免疫调节融合肽（简称 LIFP）基因的重组载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达和纯化,获得较高纯度的融合肽；研究LIFP基因体外对卵巢癌细胞SKOV3的影响,为基因治疗卵巢癌提供基础。方法以GEN-BANK报道的牛乳铁蛋白抗菌肽（ LFCINB ）与乳源免疫调节肽（ PGPIPN ）的序列为参照,以连接臂GGGGS连接两种肽,合成融合肽LIFP基因,并在其5＆#39;端加入凝血酶FXA识别的酶切位点。将LIFP基因构建到表达载体 PGEX-KG 中, PCR 筛选阳性克隆,测序鉴定后,采用最优表达条件诱导重组载体在大肠杆菌BL21中表达,超声裂菌后, SDS-PAGE和Western-blot鉴定融合蛋白（ LIFP-GST）,通过AKTA层析系统纯化融合蛋白, FXA酶切后,高效液相色谱（ HPLC）、质谱（ MS）鉴定LIFP的表达；将LIFP基因构建到PLJM1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白（ GFP ）中,获得 PLJM1-LIFP 慢病毒表达载体,经PCR检测及测序鉴定后,与慢病毒包装质粒通过 LIPOFEETAMINE 2000共转染至包装细胞293T,包装产生病毒液,并测定其滴度；体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,重组慢病毒感染细胞后, MTT法观察融合肽对SKOV3细胞的生长抑制作用, HO-ECHST33258染色观察细胞核形态的变化。结果PCR和测序证实成功构建了PGEX-KG-LIFP重组载体；WESTERN-BLOT 结果显示成功诱导LIFP 的高表达；HPLC显示获得较高纯度LIFP；MS显示氨基酸序列与目的肽一致；成功构建PLJM1-LIFP慢病毒表达载体,三质粒共转染293 T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为1.2＆#215;108 TU/ml；重组病毒感染SKOV3细胞后, MTT 结果显示融合肽对体外培养的 SKOV3细胞生长具有抑制作用（P〈0.05）,荧光显微镜观察到凋亡细胞典型的形态学特征。结论成功诱导表达纯化融合肽,并初步证实对体外SKOV3有生长抑制和诱导细胞凋亡作用。