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番茄叶片基因组DNA快速制备技术及其在基于实时荧光定量PCR的转基因检测中的应用
  • ISSN号:0253-9772
  • 期刊名称:《遗传》
  • 时间:0
  • 分类:Q781[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]浙江大学农业与生物技术学院园艺系,杭州310058
  • 相关基金:国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(编号:2011CB100602); 国家自然科学基金重点项目(编号:31030052); 浙江省自然科学基金重点项目(编号:Z3100171)资助
中文摘要:

以番茄(Solanum lycopersicum L.cv.Micro-Tom)叶片为试材,建立了一种简便快速制备叶片基因组DNA的方法。2~20 mm2的叶片即可满足制备要求,制备过程只需一种提取试剂、只涉及1次移液和1次离心操作,不涉及沉淀。确定了所制备的DNA用于实时荧光定量PCR的合适用量为0.1~0.2μL(反应总体积为12.5μL),发现过量模板的使用可降低PCR效率且可导致扩增失败。该项DNA快速制备及相适应的实时荧光定量PCR技术已成功应用于番茄转基因植株检测。

英文摘要:

Using tomato(Solanum lycopersicum L.cv.Micro-Tom) leaf as material,a simple and rapid DNA preparation protocol was established.This method required only 2-20 mm2 leaf with only one extraction solution and involved one pipetation and one centrifugation each.No precipitation was required.The suitable volume of prepared DNA solution,as PCR template,for real-time quantitative PCR was determined to be 0.1-0.2 μL in 12.5 μL final reaction volume.The ex-cessive template DNA solution was confirmed to reduce PCR efficiency and even can result in PCR failure.This technique for rapid preparation of DNA and a compatible real-time quantitative PCR were successfully applied in transgene detection of tomato plants.

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期刊信息
  • 《遗传》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国遗传学会
  • 主编:张永清
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  • 邮编:100101
  • 邮箱:yczz@genetics.ac.cn
  • 电话:010-64807669
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-9772
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1913/R
  • 邮发代号:2-810
  • 获奖情况:
  • 中国自然科学核心期刊,《CAJ-CD》执行优秀奖,2008年12月获“中国精品科技期刊”证书和北京市印...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:23270