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北京油鸡cDNA文库的构建及purH基因的表达
  • ISSN号:1000-2030
  • 期刊名称:《南京农业大学学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q344.13[生物学—遗传学] Q786[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100094, [2]蚌埠医学院检验系,安徽蚌埠233030, [3]蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠233030, [4]内蒙古农业大学动物科学与医学院,内蒙古呼和浩特010018
  • 相关基金:国家863计划项目(2006AA10Z198 2007AA10Z170); 国家自然科学基金项目(30671539); 安徽省省级自然科学研究项目(KJ2009B255Z)
中文摘要:

利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中。转染后24、48和72h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%~53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中。随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求。

英文摘要:

A cDNA library from Beijing fatty chicken liver tissue was constructed according to the protocol of SMARTTM cDNA library construction kit.The titer of the initial library was 1.96 × 106 and 1.64 × 1010 pfu·mL-1 respectively.The percentage of recombinants was 92.8% and average length of exogenous inserts was 1.23 kb.The full-length sequence of a purH gene (GenBank accession No:EU334506) was successfully amplified from the library using a pair of conserved primers.Full-length purH cDNA was inserted into the pEGFP-N3 vector and transfected into Beijing fatty chicken fibroblasts.The expression efficiency ranged from 10.3% to 53.2% in 24,48 and 72 h after transformation,and green fluorescence was distributed throughout the cytoplasm and nucleus except in the cryptomere vesicle.A high quality cDNA library from Beijing fatty chicken was successfully constructed and provided a useful resource for the functional genomic research of Beijing fatty chicken.

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期刊信息
  • 《南京农业大学学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:南京农业大学
  • 主编:郑小波
  • 地址:江苏省南京市卫岗1号
  • 邮编:210095
  • 邮箱:nauxb@njau.edu.cn
  • 电话:025-84395214
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-2030
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1148/S
  • 邮发代号:28-53
  • 获奖情况:
  • 中国自然科学核心期刊,全国优秀科技期刊,第二届江苏省十佳科技期刊,中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:22558