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正交设计优化辣椒SRAP-PCR反应体系及引物筛选
  • 期刊名称:江西农业大学学报
  • 时间:0
  • 页码:0595-0600
  • 语言:中文
  • 分类:S641.3[农业科学—蔬菜学;农业科学—园艺学]
  • 作者机构:[1]江西省农业科学院蔬菜花卉研究所,江西南昌330200, [2]江西省农业科学院油料作物重点实验室,江西南昌330200, [3]江西省农业科学院,江西南昌330200
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(30860173); 江西省农科院创新基金项目
  • 相关项目:辣椒特早熟基因精细定位及早熟相关性状QTL分析
中文摘要:

以辣椒基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP反应体系中的5种关键因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA)进行优化,结果表明,辣椒SRAP-PCR最佳反应体系为:TaqDNA聚合酶0.75 U、Mg2+0.6 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.8μmol/L、模板DNA 50 ng,总体积为10μL。运用该体系对辣椒3份种质材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从198个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的35个引物组合。该体系的建立与多态性引物组合的筛选为SRAP标记技术在辣椒分子遗传学中的应用提供科学依据。

英文摘要:

The L16(45) othogonal design was used to optimize SRAP-PCR system in pepper(Capsicum spp.) with five key factors(Taq DNA polymerase,Mg2+,dNTPs,primerand template DNA,respectively).The results showed that the optimized SRAP-PCR system for pepper was:0.75 U Taq DNA polymerase,0.6 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTPs,0.8 μmol/L primer,50 ng template DNA in a total of 10 μL reaction solution.The optimized SRAP-PCR system was tested on three pepper germplasms and was steady and reliable.35 primer combinations were selected with abundant polymorphism from 198 primer combinations.The optimized SRAP-PCR system and polymorphism primer combinations could be applied to research on molecular genetics in pepper.

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