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pSicoR/miR-17-5p靶向调控UNC-51样激酶1(ULK1)及其对细胞自噬的影响
  • ISSN号:2095-2775
  • 期刊名称:临床检验杂志(电子版)
  • 时间:2014
  • 页码:698-704
  • 分类:R446.6[医药卫生—诊断学;医药卫生—临床医学]
  • 作者机构:[1]宁夏医科大学检验学院,宁夏临床病原微生物重点实验室
  • 相关基金:国家自然科学基金(31472168,31160494);教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET 11-11023)
  • 相关项目:MicroRNAs在结核分枝杆菌感染树突状细胞中对TLRs/ MyD88信号转导通路的调控机制
中文摘要:

目的为了探讨miR-17-5p对自噬相关基因ULK1的调控作用及其对细胞自噬的影响,为更深入研究miR-17-5p调控细胞自噬机制建立理论依据。方法构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒,包装miR-17-5p过表达慢病毒,构建ULK1及其突变体ULK1-mut的pmiR-report载体,通过双荧光素酶报告系统验证miR-17-5p对ULK1的靶向关系,利用Western blot检测ULK1与LC3B蛋白的表达量。结果成功构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒并且成功将ULK1及其突变体ULK1-mut的3′-UTR插入到pmiR-report载体中;双荧光素酶报告系统结果表明转染miR-17-5p及ULK1-3′-UTR,miR-17-5p过表达组相比对照组相对荧光强度降低1.9倍(P【0.05),说明miR-17-5p对ULK1的表达有抑制作用,而转染miR-17-5p及mut-ULK1-3′-UTR之后检测显示相对荧光强度并没有降低,说明miR-17-5p是靶向作用于ULK1,并对其进行负调控;Western blot显示miR-17-5p抑制ULK1蛋白的表达,并且抑制LC3II/I蛋白的表达。结论 miR-17-5p直接靶向作用于自噬相关基因ULK1,并且对其负调控,抑制细胞自噬的发生。

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期刊信息
  • 《临床检验杂志(电子版)》
  • 主管单位:中国人民解放军总后勤部卫生部
  • 主办单位:人民军医出版社
  • 主编:从玉隆
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  • 邮编:300020
  • 邮箱:lcjyzzdzb@126.com
  • 电话:022-60372352 23229814
  • 国际标准刊号:ISSN:2095-2775
  • 国内统一刊号:ISSN:11-9316/R
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  • 国内外数据库收录:
  • 被引量:174