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高效广谱猪链球菌7型前噬菌体裂解酶的挖掘及活性研究
  • ISSN号:0253-2654
  • 期刊名称:《微生物学通报》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室,上海200240
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(No.31172381,31372500); 国家公益性行业(农业)科研专项项目(No.201303041); 上海市基础研究重点项目(No.12JC1404700)
中文摘要:

【目的】噬菌体具有防控耐药性病原菌的抗菌应用潜力,但是有些病原菌噬菌体的获得非常困难,研究发现大多数病原菌存在前噬菌体(Prophage),且由前噬菌体编码的裂解酶(Endolysin)具有良好的抗菌应用前景,本研究将挖掘猪链球菌前噬菌体及其编码的裂解酶。【方法】通过对Gen Bank中登录的数株猪链球菌前噬菌体裂解酶的基因信息分析,挖掘出一株猪链球菌7型菌株前噬菌体编码的裂解酶,研究其生物学活性。以猪链球菌7型菌株7917的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得裂解酶基因ly7917,将其克隆至质粒p ET28a(+)并转化大肠杆菌DH5α细胞,挑选基因序列正确的阳性克隆、抽提质粒、转化表达菌株大肠杆菌BL21,经IPTG诱导可高效表达裂解酶Ly7917。【结果】平板裂解试验结果显示Ly7917具有高效裂菌活性,能够裂解猪链球菌2型高致病力菌株HA9801;浊度递减试验结果显示该裂解酶能够高效裂解猪链球菌2型、7型、9型和马链球菌兽疫亚种参考株、金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)等多种革兰氏阳性菌。【结论】基于前噬菌体挖掘的裂解酶Ly7917,具有高效广谱裂菌活性,为临床上利用裂解酶治疗耐药菌的混合感染提供了可能。

英文摘要:

[Objective] In recent years, there has been an increasing worldwide prevalence of bacterial resistance to a wide range of antibiotics, resulting in a focus of research interest in bacteriophage. Unfortunately, Streptococcus suis(SS) bacteriophage is not easy to isolate, and the endolysin encoded by phage has been examined as a potential agent for SS control. [Methods] In this study, based on the analysis of genomic information of several Streptococcus suis deposited in Gen Bank, we mined and analyzed one endolysin named Ly7917 encoded by a prophage harbored in Streptococcus suis serotype 7(SS7) genome. The ly7917 gene was amplified by PCR using bacterial genome purified from a SS7 strain 7917 as template and then inserted into the p ET28a(+) plasmid. The recombinant plasmid p ET28a(+)-ly7917 was transformed into Escherichia coli DH5α, the sequencing of positive colony showed 100% homology with the target gene. The recombinant plasmid was then transformed into E. coli BL21 and induced with IPTG for expression. [Results] The result of plate analysis showed that Ly7917 has highly activity and can lysis Streptococcus suis serotype 2 strain HA9801. In addition, bacterial turbidity test showed that Streptococcus suis serotype 7, serotype 9, most of serotype 2 strains, Streptococcus equi subsp. zooepidemicus strain, Staphylococcus aureus(including Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) were highly sensitive to Ly7917. [Conclusion] Effective and broad-spectrum characteristics of Ly7917 mined from prophage brings hope for mixed infection in clinical as an effective therapeutic.

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期刊信息
  • 《微生物学通报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院微生物研究所 中国微生物学会
  • 主编:赫荣乔
  • 地址:北京市朝阳区北辰西路一号院3号中国科学院微生物研究所内B401室
  • 邮编:100101
  • 邮箱:xuj@sun.im.ac.cn
  • 电话:010-64807511
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-2654
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1996/Q
  • 邮发代号:2-817
  • 获奖情况:
  • 1992年中国科学技术协会优秀学术期刊三等奖,1992年国家科委中共中央宣传部新闻出版署“全国优...,2000年中国科学院优秀期刊三等奖,中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:29487