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重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN（1～4）的构建和表达

ISSN号：0253-9896
期刊名称：《天津医药》
时间：0
分类：R382.5[医药卫生—医学寄生虫学;医药卫生—基础医学]
作者机构：[1]天津医科大学免疫教研室,300070, [2]天津医科大学基础医学研究中心,300070, [3]天津医科大学生化教研室,300070
相关基金：国家科技部“863”项目（项目编号：2007AA022115）;国家自然科学基金资助项目（项目编号：30670441,30970562,30670802,30811130394,30911130165,30970582）;天津市科委国际合作项目（项目编号：07JCZDJC07300）;国家自然科学重大研究计划培育项目（项目编号：90919032）;国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20091202110001）;天津市教委重点项目（项目编号：2008ZD01）;天津医科大学科学基金（项目编号：2007ky03,2009xk09）

作者：付晓[1], 朱梦瑜[1], 高星杰[2], 钱宝鑫[1], 王保亚[1], 赵虹[1], 葛林[3], 杨洁[2,3]

关键词：质粒, 遗传载体, 发光蛋白质类, 重组融合蛋白质类, 转染, HELA细胞, 人类Tudor-SN蛋白, plasmids genetic vectors luminescent proteins recombinant fusion proteins transfection HeLa cells human Tudor-SN protein

中文摘要：

目的：将人类Tudor-SN蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法：以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN（1～4）重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果：以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论：重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN（1～4）质粒构建及表达成功。

英文摘要：

Objective： To construct eukaryotic red fluorescent protein （RFP） expressing recombinant plasmids,pERFP-C1-hTudor-SN-SN（1-4）,which contain SN（（1-4） fragments of human Tudor-SN.Methods： The genes of Tudor-SN fragments were amplified by PCR from the recombinant pSG5-Tudor-SN-flag plasmid and inserted into pERFP-C1 fluorescent expressing vector with EcoRⅠ and BamHⅠ site.These recombinant pERFP-C1-hTudor-SN-SN （1-4） plasmids were transfected into HeLa cells and the expression of red fluorescent fusion proteins was examined by fluorescence microscope.Results： The SN（1-4） fragments of Tudor-SN were sequenced correctly and detected in the products of the restriction single/double enzyme digestion.The red fluorescent fusion proteins were observed in HeLa cell after the transfection.Conclusion： These recombinant eukaryotic plasmids of pERFP-C1-Tudor-SN（1-4） were constructed successfully and expressed effectively.

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