中文摘要：

目的克隆、表达摩氏摩根菌噬菌体编码的内溶素基因,为内溶素的生物学活性检测提供纯化蛋白产物。方法以摩氏摩根菌噬菌体基因组为模板扩增内溶素全长基因,并将其插入原核表达载体pQE31中,成功构建了内溶素重组质粒pQE31-M12;将重组质粒转化大肠埃希菌JM109,获得了表达稳定的基因工程菌,并优化了表达条件;该表达菌经过超声裂解及SDS-PAGE电泳,确定重组融合蛋白的表达形式,并利用亲和层析及分子筛层析纯化目的蛋白;利用平板扩散法检测重组蛋白抑菌活性。结果内溶素基因重组质粒pQE31-M12经酶切及测序鉴定正确;重组工程菌经0.5mmol/LIPTG在37℃诱导5h后内溶素重组蛋白可获得最佳分泌型表达,对其蛋白裂解上清行非变性的Ni-NTA柱亲和层析以及分子筛层析纯化后,获得单一条带的目的蛋白;该重组蛋白对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用。结论成功构建了表达内溶素基因的大肠杆菌工程菌,获得了纯化的表达产物,并初步证明该内溶素蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长,为进一步改组内溶素的结构并增强其抗菌功能奠定了基础。

英文摘要：

Objective To construct,express,and purify the recombinant endolysin encoded by Morganella morganii bacteriophage MmP1 for the detection of its biological function. Methods The objective endolysin gene was amplified from the genome of bacteriophage MmP1,and then cloned into a procaryotic expression vector to construct recombinant plasmid pQE31-M12,which was subsequently transformed into E.coli JM109. The affinity chromatograph plus gel chromatography was applied to purify the endolysin protein under native c...