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黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因克隆与原核表达
  • ISSN号:1674-568X
  • 期刊名称:《基因组学与应用生物学》
  • 时间:0
  • 分类:Q[生物学]
  • 作者机构:贵州医科大学生物与医学工程重点实验室,贵州医科大学医药生物技术工程研究中心,贵州医科大学生物与工程学院,贵阳550004
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(31260227,31660258)、中国博士后科学基金(2015M582758XB)、贵州省科技创新人才团队项目(黔科合人才团队(2015)4021)、贵州省科技项目(黔科合LH字[2014]7092)、贵州省高校优秀科技创新人才支持计划(黔教合KY字[2014]244)、贵阳市科技计划项目(筑科合同[2014]37号)和国家级大学生创新训练计划项目(201510660001)基金共同资助
中文摘要:

根据NCBI数据库中的黄曲霉细胞壁蛋白AFLMPl的基因序列设计特异引物,以黄曲霉菌总RNA逆转录获得的cDNA为模板,PCR扩增目的基因后分别克隆到pGEX-6p-1和pET-22b原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。重组大肠杆菌经IPTG诱导表达后超声波破碎提取可溶性蛋白,SDS-PAGE电泳和Western杂交检测表达产物,结果表明GST-AFLMP1和AFLMP1-His融合蛋白能够在大肠杆菌中大量可溶性表达,可分别作为制备AFLMP1特异抗体的免疫抗原和筛选抗原。

英文摘要:

Specific primers were designed according to the gene sequence of the cell wall protein AFLMP1 of Aspergillus flavus that derived from the database of NCBI. Total RNA ofAspergillus flavus was extracted and reverse transcribed into cDNA to take as template. Then, A FLMP1 gene was amplified by PCR and respectively cloned into pGEX-6p-1 and pET-22b to construct prokaryotic expression vectors. Subsequently, the recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), and then induced for protein expression by IPTG. The bacteria were treated using ultrasonic disruption and the soluble protein was extracted. After purification, the proteins were detected by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that both GST-AFLMP1 and AFLMP1-His fusion proteins could be largely expressed in bacteria with soluble form. They can be respectively used as immunogen and screening antigen for preparing AFLMP1 specific antibody.

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期刊信息
  • 《基因组学与应用生物学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:广西大学
  • 主办单位:广西大学
  • 主编:朱玉贤
  • 地址:广西南宁市大学东路100号广西大学西校园《基因组学与应用生物学》编辑部111室
  • 邮编:530004
  • 邮箱:gab@hibio.org 571388455@qq.com
  • 电话:0771-3239102
  • 国际标准刊号:ISSN:1674-568X
  • 国内统一刊号:ISSN:45-1369/Q
  • 邮发代号:48-213
  • 获奖情况:
  • 全国优秀高校学校自然科学学报,教育部优秀科技期刊,广西优秀科技期刊,中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,美国剑桥科学文摘,英国动物学记录,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:4299