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氟甲喹单克隆抗体制备、鉴定及间接竞争酶联免疫吸附分析法
  • ISSN号:0253-3820
  • 期刊名称:《分析化学》
  • 时间:0
  • 分类:S859.84[农业科学—临床兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医] TS252.1[轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程;轻工技术与工程—食品科学与工程]
  • 作者机构:[1]广东省食品质量安全重点实验室,华南农业大学食品学院,广州510642
  • 相关基金:国家自然科学基金(No.30901005); 国家863计划(No.2007AA10Z437); 广东省科技计划项目(No.2009A020101004); 广东省自然科学基金(No.06300421)项目资助
中文摘要:

以氟甲喹(FLU)为原料,合成4个碳原子手臂的半抗原(FLUABA),采用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过免疫Balb/c小鼠及细胞融合,获得1株稳定分泌抗氟甲喹单克隆抗体的杂交瘤细胞株DB6-E7,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数(KA)为8.19×108L/mol。将氟甲喹、FLUABA及6个碳原子手臂的半抗原FLUACA分别与卵清白蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,研究异源包被对间接竞争ELISA灵敏度的影响。结果表明,异源包被可显著提高ELISA方法的灵敏度。基于最佳异源包被(FLU-OVA)的酶联免疫吸附分析法的IC50为26.33μg/L,检出限为4μg/L,定量检测范围为8.0~114μg/L(IC20~IC80)。与喹诺酮类药物及结构类似物几乎不存在交叉反应,特异性高。此方法可满足畜禽产品中氟甲喹残留的快速筛查。

英文摘要:

The hapten of Flumequine( FLU) with four carbon atoms spacer arm( FLUABA) was synthesized and coupled to bovine serum albumin( BSA) as immunogen using activated ester method. Balb/c mice were immunized by the artificial immunogen and the splenocytes of immunized mice were fused with Sp2 /0 cells to obtain the monoclonal antibody( McAbs) . A hybridoma cell line( DB6-E7) secreting anti-flumequine McAbs was obtained by limited dilution method and screened by indirect enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA) using heterogenous coating antigen. The results showed that the subtype of the McAb was IgG1,and the affinity was 8. 19 × 108 L/mol. The haptens of FLU,FLUABA and FLUACA,with different space arm, were separately linked to ovalbumin( OVA) for heterologous or homologous coating antigen. The results of indirect ELISA and indirect competitive ELISA ( icELISA) indicated that the heterologous coating antigen could improve the sensitivity of ELISA significantly. By heterologous coating antigen ( FLU-OVA) ,the icELISA showed an IC50 value of 26. 33 μg/L,LOD of 4. 0 μg/L,and the workable range of 8-114 μg/L ( IC20–IC80) . Cross-reactivity studies showed that the McAbs were quiet specific for FLU,no cross-reactivity ( 0. 1%) was detected between the obtained McAbs and the quinolones compounds or other structural similarity compounds. The developed icELISA for FLU can satisfy the detection criteria of flumequine in animal food-products.

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期刊信息
  • 《分析化学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院长春应用化学研究所
  • 主编:杨秀荣
  • 地址:长春市人民大街5625号
  • 邮编:130022
  • 邮箱:fxhx@ciac.ac.cn
  • 电话:0431-85262017
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-3820
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1125/O6
  • 邮发代号:12-6
  • 获奖情况:
  • 1999获首届国家期刊奖,2000年获中国科学院优秀期刊特别奖,2001年入选中国期刊方阵“双高”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,美国乌利希期刊指南,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:52455