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嗜热厌氧乙醇菌JW200转化条件的研究
  • ISSN号:1671-8135
  • 期刊名称:《中国生物工程杂志》
  • 时间:0
  • 分类:Q785[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡214036, [2]南京师范大学微生物工程重点实验室,南京210097
  • 相关基金:国家“973”项目子课题基金资助项目(2004CB719600)
中文摘要:

嗜热厌氧乙醇菌遗传转化系统的缺少,制约了对该菌理论基础和应用领域的进一步研究。利用聚乙二醇(PEG6000)转化和电转化技术,国际上首次实现了嗜热厌氧乙醇菌JW200外源基因的导入。PEG转化效率很低,因此选择对电转化条件进行优化,转化效率从4±3.2个转化子/μg质粒DNA提高到50±7.4个转化子/μg质粒DNA。实验表明获得较高的转化效率的必要条件是在细胞密度为OD660 0.2时添加甘氨酸与蔗糖后,继续培养2h以及细胞在电击前的收集与洗涤保持低温。实验为利用基因工程手段改造嗜热厌氧乙醇菌,从分子水平研究胞内乙醇代谢途径奠定了基础。

英文摘要:

It is necessary to develop a genetic transformation system for Thermoanaerobacter ethanolicus JW200 to study gene function and regulation. To realize this, the gene transfer techniques for this organism were first developed. Firstly, transformation using polyethylene glycol (PEG6000) was obtained using T. ethanolicus- Escherichia coli shuttle plasmid pTE16. Secondly, electrotransformation was employed to introduce plasmid pTE16 into Thermoanaerobacter ethanolicus. Transformation efficiency of PEG method was very low, so electrotransformation procedures were optimized to enhance transformation frequency from 4 ± 3.2 to 50 ± 7.4 transformants per μg plasmid DNA. The most crucial factors conducive to achieve higher transformation efficiency included the appropriate degree of weaken cell wall and the chilling of cells during cell collection and washing. The results reported here provide the first unequivocal gene transfer method functional in T. ethanolicus that is suitable for molecular manipulations.

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期刊信息
  • 《中国生物工程杂志》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院文献情报中心 中国生物技术发展中心 中国生物工程学会
  • 主编:张树庸
  • 地址:北京市中关村北四环西路33号
  • 邮编:100080
  • 邮箱:biotech@mail.las.ac.cn
  • 电话:010-82624544 82626611-6631
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-8135
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4816/Q
  • 邮发代号:82-673
  • 获奖情况:
  • 1991年中国科学院科技进步三等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:12959