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不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究
  • ISSN号:1004-874X
  • 期刊名称:《广东农业科学》
  • 时间:0
  • 分类:S917.4[农业科学—水产科学]
  • 作者机构:[1]上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室,上海201306, [2]上海海洋大学上海高校知识服务平台水产动物遗传育种中心,上海201306
  • 相关基金:国家“863”计划项目(2012AA10A409-5);科技部科技型中小企业技术创新项目(14C26213201214);上海市科学技术委员会项目(13231203504,13DZ2280500);上海高校水产学一流学科建设项目(沪教科2012-62)
中文摘要:

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃〉肌肉〉刚毛〉血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。

英文摘要:

To optimize genome DNA extraction method of Chinese mitten crabs, genome DNA was extracted from gills,muscle, blood and bristles of Chinese mitten crabs using phenol-chloroform method and DNA extraction kit, and the quality of these DNA samples was evaluated in four aspects: the purity, concentration, fragment completeness and microsatellite marker PCR amplification effect. The results showed that, compared with the method of DNA extraction kit,the DNA extracted by phenol-chloroform method was much more complete, had higher concentration, but lower purity.Both the extraction methods showed that the purity of DNA in bristles and blood were higher than that in the gills and muscle, and the descending order of DNA content was gill, muscle, bristles, blood, while the uncutting bristles were failed to extract genomic DNA. Microsatellite PCR electrophoresis results showed that the DNA extracted from four different tissues by two dissimilar DNA extraction methods could meet the requirements of the application of microsatellite markers.In conclusion, the present study established a convenient noninvasive sampling method and a procedure of DNA extraction that could promote genetic breeding and molecular marker research of E. sinensis.

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期刊信息
  • 《广东农业科学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:广东省农业科学院
  • 主办单位:广东省农业科学院 华南农业大学
  • 主编:
  • 地址:广州市天河区金颖路31号五山广东省农科院农经所
  • 邮编:510640
  • 邮箱:gdnykx@vip.163.com
  • 电话:020-38319948 38319941 38319942 38319946
  • 国际标准刊号:ISSN:1004-874X
  • 国内统一刊号:ISSN:44-1267/S
  • 邮发代号:
  • 获奖情况:
  • 广东省第二、第三届优秀科技期刊,广东省首届十佳期刊,中国期刊方阵“双效”期刊,第四届全国农业优秀期刊一等奖,第五届全车优秀农业期刊鑫犁奖一等奖,首届全国CAD规范一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国动物学记录,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版)
  • 被引量:33995