中文摘要：

疫苗和药物目前仍然是预防和治疗病毒性疾病的主要手段。近年来，一种在病毒性疾病的防治中极具潜力的新技术，即所谓的RNA干扰（RNAi）已经成为该领域的研究热点。本课题将克隆草鱼内源U6基因, 详细分析其启动子活性, 并构建能高效表达发卡RNAi的质粒载体, 同时以草鱼出血病为模型，应用转基因技术，通过向鱼类细胞或受精卵中导入由U6基因启动子驱动表达的病毒发卡RNAi片段, 以阻断草鱼出血病病毒的两个重要外壳蛋白基因VP5和VP7的表达, 从而抑制或完全破坏病毒的繁殖和扩增. 该模型的建立不仅对RNAi在鱼类抗病中的分子机理和应用前景展开探索性研究，为将来获得鱼类抗病新品系奠定基础. 同时将为研究鱼类基因的功能和信号转导提供有效的手段。

结论摘要：

本课题利用RNAi技术，以草鱼出血病为模型，结合转基因技术，对RNA干扰在鱼类抗病中的分子机理和应用前景展开了探索性研究，主要包括克隆了草鱼内源H1基因的启动子，详细分析了其启动子活性，并构建了能高效表达发卡RNA的质粒载体，选取GCRV（草鱼出血病病毒）的重要外壳蛋白基因VP7作为靶基因，并筛选获得了抑制VP7基因表达的最佳siRNA位点，分别在细胞水平和个体水平对RNAi的抗病活性进行了研究。研究表明，草鱼H1启动子可以较好的转录shRNA；GCRV病毒的外壳蛋白基因VP7可以作为抗病毒的靶基因；由草鱼H1启动子驱动的RNAi载体在培养细胞以及成鱼体内都可以抑制病毒的复制，阻断病毒粒子的形成。此外，为建立更为普遍的利用RNA干扰技术进行基因沉默的研究模型，我们利用CMV启动子，斑马鱼的H1，U6 启动子以及T7 转录系统分析RNAi在斑马鱼中的应用，以期建立在斑马鱼中通过体内转录产生持续抑制的RNAi 的研究平台，为斑马鱼及其它经济鱼类中基因功能及信号网络的研究打下良好的研究基础。