中文摘要：

将当前国际最新进展的RNA干扰（RNAi）、条件性基因敲除、常规转基因动物等三大技术进行有机整合，建立起一项能用相对便捷的常规转基因操作来实现目的基因定时、定位沉默的模式动物制备新技术即条件性RNAi转基因动物技术。以全身表达之报告基因LacZ为RNAi的靶基因（以Rosa 26小鼠为转基因受体）；利用Cre / LoxP系统原理，构建由U6启动子驱动的、含LoxP-STOP-LoxP信号的LacZ-RNAi表达载体，并以原核注射方法制备Cre触发性（条件性）的LacZ-RNAi转基因小鼠；将此小鼠与K14-Cre转基因小鼠交配，所形成的子代胚胎以X-Gal组织化学法检测LacZ基因的RNAi效应，确认LacZ基因的定位沉默；通过程序优化形成可靠的技术模式。从而克服现行基因敲除动物技术所存在的操作复杂、条件要求高、实验周期长等缺点，简化模式动物制备，促进我国基因功能分析技术的跨越性进步。

结论摘要：

本研究旨在将条件性基因敲除、RNAi和常规转基因动物三大技术进行有机整合，建立起一项应用相对便捷、可靠的常规转基因操作来实现目的基因定时、定位沉默的模式动物制备技术- - 条件性RNAi-转基因动物技术。核心和关键内容是Cre触发性的靶基因RNAi载体制备及其功能检测。研究利用分子克隆技术成功构建了可通用于各种靶基因的Cre触发的条件性RNAi转基因载体pCSilencer和针对EGFP产生RNAi效应的pCS-EGFP-T98、具有生物活性的含有报告基因的Cre酶表达载体pCMV-Cre-EGFP。运用293T细胞模型对条件性RNAi载体功能进行体外实验研究，应用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测。经过表明，当Cre重组酶存在时，pCS-EGFP-T98能对EGFP产生RNAi效应，基因沉默效率≥51.5%。结果证明了Cre/LoxP调控系统可以实现条件性的RNAi效应，从理论上证明了Cre触发的条件性RNAi转基因动物技术路线的正确性与可行性。研究还提示了shRNA后带LoxP（34bp）尾巴并不消除RNAi效应，为RNAi机制研究增添了实验数据。