利用分子生物学技术对禽流感病毒受体神经氨酸苷酶(NA)基因克隆,并联合鸡Mx基因,构建可转染到家禽细胞并能持续稳定表达的质粒;比较了 NA 基因 、Mx 基因和 Mx-NA 联合基因表达产物的抗病效果;将用构建的双基因共表达质粒生产转基因鸡,探索其抗病能力。结果①构建原核表达载体pGEX-NA,经IPTG诱导获得了表达,且抗NA血清可识别表达产物;②构建真核表达质粒pcDNA3.0-NA免疫小鼠后可诱导机体产生特异性抗体;③分别克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA,构建了Mx-NA双基因真核共表达载体,重组Mx-NA融合蛋白亚细胞定位于细胞质;④抗NDV感染结果显示,分别单独转染突变型Mx或者NA 基因的CEF细胞在孵育的48 h内未受NDV的浸染;⑤联合转染Mx-NA双基因共表达载体的CEF 细胞在攻毒72h内未受NDV的浸染;⑥联合基因转染组显著地比单基因转染突变型Mx或者NA 基因组抵御NDV感染的时间延长了;⑦体内精原干细胞介导Mx-NA双基因生产抗病转基因鸡,后代Western blot检测,28.6%表现为阳性。
英文主题词Mx gene; NA gene; Mx-NA combined protein; antiviral; transgenic