从分子水平和三维立体角度获取药物抗原决定簇(epitope)的结构信息,了解决定抗体亲和力和特异性的分子间作用力的构成和贡献率,有助于药物半抗原的设计和免疫分析反应条件的调控,是开展"信息含量丰富"(Information-rich)的免疫分析检测药物残留设计的基础。本研究拟选用四环素类药物为研究对象,应用分子模拟技术获取药物分子的理化、拓扑和电性等结构信息,辅助设计四环素类药物的最佳半抗原,制备相应的多克隆抗体或单克隆抗体;应用数理统计分析四环素类药物结构与抗体识别能力的相关性(结构-效应关系),从药物抗原角度,获取抗体-抗原分子识别的主要作用位点和主要分子间作用力等信息,指导调整免疫分析检测四环素类药物的反应条件,最大程度的降低基质效应,提高免疫分析的灵敏度和稳定性。本研究有助于免疫分析检测兽药残留的设计合理化,对于初步阐明免疫分析检测药物小分子的本质具有一定的学术价值和应用价值。
Tetracycline;Hapten design;broad-specific antibody;immunoassay;recognition mechanism
合成了四环素类药物抗原(免疫原和包被原)26种,确定了四环素类药物最佳半抗原2种(TC-甲醛-BSA和TC-4AS-BSA),制备了四环素类广谱性多克隆抗体和单克隆抗体各1个,多克隆抗体能识别四环素类药物至少7种,单克隆抗体能识别四环素类药物至少13种(半数抑制量小于50 ng/mL)。利用单克隆抗体建立了牛奶中四环素类药物(四环素、金霉素、土霉素和多西环素)的酶联吸附免疫分析和基于胶体金标记的免疫层析检测技术,方法的灵敏度达到了国家对四环素类药物在牛奶中的残留限量要求。同时,建立了多克隆抗体与四环素类药物的三维定量构效关系(3D-QSAR),了解了影响抗原-抗体反应的作用力信息,阐明了抗体与四环素类药物之间的作用机制,初步构建了“信息含量丰富”的四环素类药物的免疫分析检测技术。