中文摘要：

先天性心脏病是由于胚胎心血管发育异常所致的一类出生缺陷，但易感基因尚未明确。TBX5是在心脏发育中起关键作用的转录因子。本研究在前期工作基础上，应用酵母双/单杂交技术鉴定小鼠胚胎不同发育时期心脏中与TBX5存在相互作用的转录因子，再以这些转录因子为诱饵，钓取相关蛋白，从而建立心脏发育中以TBX5为核心的基因组蛋白连锁图。进一步明确这些蛋白的人类同源基因，并研究这些基因在人类单纯性先天性心脏病发生中的作用。以明确单纯性先天性心脏病的易感基因，并对心脏发育过程中转录因子的作用及调控机制有所认识，为先天性心脏病的防治奠定基础。

结论摘要：

TBX5是胚胎心脏发育关键的转录因子。本研究首次从鼠胚心脏中克隆了大鼠TBX5基因cDNA全长（GeneBank登录号为AY859491），进行组织表达谱、亚细胞定位研究，并构建了大鼠TBX5基因原核表达载体，IPTG低温诱导表达获得TBX5-GST融合蛋白，为深入研究TBX5基因调控机制奠定基础。TBX5基因上游调控序列研究表明，其启动子区域突变、甲基化可能不是引起TBX5基因表达下调的原因，转录起始点上游-139~-142和-312~-315存在Nkx2-5的结合位点，Nkx2-5可作为增强子调控TBX5的表达。应用免疫共沉淀技术，我们又分别从人胚15周心脏和鼠胚14.5d心脏中获得了与TBX5相互作用的蛋白质β-MHC和ACTC。生物信息学分析表明TBX5羧基端残基267-448与酵母DNA指导的RNA聚合酶II最大亚基羧基端结构域高度同源；TBX5羧基端高度保守的Tyr291和Tyr342残基是潜在的磷酸化位点，该磷酸化位点的缺失可能是引起心脏畸形的部分分子机制。在TBX5羧基端的丝氨酸，酪氨酸磷酸化/去磷酸化可能在TBX5转录激活中发挥作用。