中文摘要：

特异性免疫治疗（脱敏治疗）被认为是当前过敏性疾病唯一的对因治疗方法。目前使用的标准化脱敏疫苗有诱导IgE介导的过敏反应的危险。通过基因操作进行过敏原改造,减少其致敏性,保留其免疫原性。这种疫苗称为低致敏过敏原疫苗。美洲大蠊是一种主要室内过敏源。Per a 10 是美洲大蠊主要过敏原。我们采用生物信息学软件分析，ELISA，嗜碱性粒细胞激发实验和T细胞增殖实验验证,明确鉴定出Per a 10的主要T细胞表位和IgE结合表位。在此基础上采用Ig E结合表位点突变和构象改变突变两个方法得到低致敏过敏原Per a 10候选重组蛋白。采用免疫印迹，ELISA，皮试，嗜碱性粒细胞激发实验比较它们的Ig E结合活性。采用T细胞增殖实验比较它们的抗原性。动物致敏实验比较它们诱导保护性抗体Ig G的能力。从而筛选出一个能保持抗原性，但是Ig E结合活性明显下降，同时表达体系能够稳定表达的突变体做为候选疫苗

结论摘要：

Per a 10是美洲大蠊中的主要过敏原蛋白，国内外对此研究很重视。我们对Per a 10的B表位和T表位进行了深入研究，我们首先克隆出蟑螂过敏原基因，亚克隆到pET-22b(+)表达质粒中，转化到大肠杆菌Rosette-gami中，诱导表达出Per a10蛋白，纯化后再变性复性得到重组Per a10蛋白。构建了Per a 10的三级结构，通过运用DNAStar软件的Protean模块、 在线预测工具Bioinformatics Predicted Antigenic Peptides (BPAP)和BepiPred 1.0 server三种方法对Per a 10的抗原B表位进行预测，得到Per a 10B细胞表位为2-12，55-67，98-120，125-133，149-160，170-182，201-208和223-227。选择NetMHCIIpan-3.0方法对HLA-DR型的T表位进行预测，而对于HLA-DQ基因型的T表位预测，使用NetMHCII-2.2方法。预测出了2个基于HLA-DR基因型的T表位81-92和139-147。预测基于HLA-DQ基因型的T表位为81-92和162-170。所以最终的预测出来的T表位为81-97，139-147和162-170。我们根据预测的表位合成多肽，正在临床验证中。本课题研究以第一或通讯作者共发表SCI收录论文6篇、已接受SCI收录2篇，修回1篇。共同作者发表SCI收录论文2篇（均标注该基金支持）。培养硕士研究生1名，在读硕士生1名。