中文摘要：

颗粒溶素（granulysin）为存在于人类细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞胞浆颗粒中的溶细胞蛋白，具有广谱的抗微生物和杀伤肿瘤细胞作用，但T淋巴细胞颗粒溶素表达的基因调控机制未知。研究表明外周血CD4+T淋巴细胞颗粒溶素的表达依赖于白细胞介素2（IL-2）信号通路激活的信号转导和转录激活因子5（Stat5）。核苷酸序列分析发现在颗粒溶素基因转录起始位点上游20kb非编码序列中存在若干潜在的Stat5结合位点，为确定这些潜在结合位点在颗粒溶素表达中的调控作用，本项目拟将颗粒溶素基因上游20kb的序列分段克隆至含有荧光素酶的载体上，并将这些重组质粒转染CD4+T淋巴细胞系CRL-2105细胞，随后用IL-2激活，通过检测细胞中荧光素酶的表达水平来确定颗粒溶素表达的正调控序列，并通过构建缺失以及定点突变体，染色质免疫沉淀等实验方法验证这些正调控序列，最终揭示颗粒溶素表达的基因调控机制。

结论摘要：

颗粒溶素（granulysin）存在于人类细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞胞浆颗粒中，具有广谱的抗微生物和杀伤肿瘤细胞活性。我们已经证实STAT5参与调控颗粒溶素的表达，然而其调控机制未知。本项目发现，在CRL-2105和 CD4+ T细胞中，IL-2可诱导颗粒溶素表达并杀死肺炎隐球菌，这与原代CD4+ T细胞类似。在这两种细胞中，我们利用荧光素酶报告系统分析颗粒溶素基因上游的增强子活性，发现STAT5结合位点位于颗粒溶素转录起始位点上游18302和18177之间。此外，利用异源的SV40启动子进行研究，发现该增强子的活性与序列方向无关。染色质免疫沉淀（ChIP）和凝胶电泳迁移率实验（EMSA）发现STAT5具有有结合该增强子的能力，而突变STAT5结合位点则使该增强子活性丧失。在原代CD4+T细胞中，过表达一个显性负突变体DN STAT5a显著抑制IL-2激活的STAT5的增强子结合力和抗隐球菌的能力。本项目阐明T淋巴细胞颗粒溶素表达的基因调控机制，可以为临床上恢复HIV感染病人颗粒溶素的表达，进而抵抗微生物感染奠定科学理论依据。