植物病毒粒子侵入寄主后脱去衣壳蛋白的同时,其核酸即与寄主核糖体相结合,开始复制病毒的初期蛋白质;从此刻起病毒的增殖与寄主的代谢融为一体,抑制病毒增殖的药剂很难不伤害寄主。以抑制病毒核酸与寄主核糖体结合为药剂作用点,建立病毒病治疗药剂的快速筛选方法。从麦胚中提取植物核糖体, 将32P-ATP标记的烟草mRNA及TMV RNA分别与核糖体相结合,经梯度离心分离未结合的RNA后,用液闪计数器检测两种RNA结合率。将32P -mRNA与TMV RNA混合; 或将 mRNA与32P -TMV RNA混合,然后使它们分别与核糖体结合并测定结合率的变化,计算二者结合率之比,即竞争系数。加入待测药物后,以mRNA结合率下降为药害指标(I),TMV RNA结合率下降为防治指标(II)。在活体细胞水平实验中,用2P-ATP标记的TMV RNA感染烟草叶肉原生质体,以原生质体存活率为I,TMV RNA与核糖体结合率及感染率为II,由此建立选择性植物病毒病治疗药物筛选体系;并将该体系在整株实验中验证。用TMV感染烟草植株,以植株增长率为I,以植物体内病毒浓度为II。与常用的抗病毒剂筛选方法不同,该方法兼顾药剂对病毒的作用及对寄主的作用,并可研究药剂作用机理。
英文主题词Plant virus disease; Chemotherapeutant; Screening system