mTOR(the mammalian target of rapamycin)信号通路介导营养信号的刺激,进而调节细胞的生长与增殖并与胚胎发育、幼体生长、成体进食和某些疾病的发生密切相关。在本项目中,首先,我们利用mTOR特异性抑制剂CCI-779处理内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,发现mTOR信号通路的活性降低,抑制细胞增殖,阻滞细胞周期进程,证明mTOR信号通路在绒山羊胎儿成纤维细胞生长增殖中发挥重要作用。同时我们克隆了内蒙古白绒山羊的13个与mTOR信号通路相关的基因并分析了它们各自的表达模式。之后,我们运用了酵母双杂交和免疫共沉淀等蛋白质组学的技术阐明了FAK和TSC2之间存在着直接的相互作用。同时,我们又运用了RNAi的技术沉默胎儿成纤维细胞中FAK的表达,检测了与mTOR通路中相关激酶的表达量和磷酸化程度,发现mTOR信号通路活性受到抑制,表明FAK可能是mTOR信号通路的上游正调节因子。初步阐明了绒山羊胎儿成纤维细胞中FAK和mTOR信号通路调节细胞生长的分子机制,为我们进一步确定mTOR信号通路在羊胚胎干细胞和早期胚胎的生长发育中的作用奠定了理论与技术基础。
英文主题词mTOR;fetal fibroblast;Co-IP;Yeast Two-Hybrid System;RNAi