构建中华鲟肝组织cDNA文库,用RT-PCR方法克隆生长激素受体cDNA,功能性表达于CHO细胞。与已知种属GHR进行同源性比较,找出存在于中华鲟GHR中的某些功能性氨基酸残基/结构域差异,用定点/缺失突变方法构建突变体,建立稳定表达野生/突变型GHR的CHO细胞株。测定这些细胞表达的GHR的配体结合活性和GHRs的转录水平以及各细胞株培养液中生长激素结合蛋白质水平。GH诱导细胞后,用相应的抗体检
我们构建了中华鲟肝组织cDNA文库,并用RT-PCR技术成功克隆到中华鲟生长激素受体cDNA。于CHO细胞中功能鉴定后,与已知种属GHR的同源性比较发现了一些功能性氨基酸残基/结构域的差异。构建相应突变型GHR后,建立稳定表达野生型/突变型GHR的CHO细胞.利用这些细胞,在不同种属GH或其它试剂刺激的下,我们检测了中华鲟生长激素结合蛋白质的生成情况以及JAK2和STAT5的磷酸化。最后研究了转染表达于上述稳定表达细胞中的Spi2.1和pp95转录活化情况。本项目的研究最终在分子水平分析了中华鲟GHR/GHBP在漫长的遗传进过程中表现出来的与其它高等哺乳动物以及某些现代鱼类GHR/GHBP之间的特异性,为了解物种进化及分类提供了有力的分子生物学信息。