中文摘要：

哮喘是一种多基因病,具有较强的遗传倾向.迄今研究发现,哮喘涉及的染色体有10多条,候选易感基因达170多个,但已报道研究结果之间的一致性和重复性较差.分析其中的原因，除种族差异、表型异质性与分层的不同外，研究策略、技术路线和方法应该也是导致结果不一致的主要原因之一.本项目根据哮喘发病的免疫学机理,通过候选基因途径对FcεR1介导的肥大细胞级联激活信号转导网络的基因群进行研究.首先,选取10个哮喘核心家系、30个病例和30个对照组个体,采取重测序策略,对目标网略中35个蛋白的编码基因进行深度测序,鉴定哮喘的易感基因.然后,根据测序鉴定的易感基因,并结合NCBI和HapMap数据库信息,构建一套既可覆盖整个候选基因群,又有代表性和特异性的SNP和CNV组,以此为基础定制基因芯片.进一步对1000例病例对照样本进行芯片基因分型,验证测序鉴定的哮喘易感基因.同时,验证以网络为功能单元策略的可行性.

结论摘要：

支气管哮喘（简称哮喘）是以气道慢性炎症、气道高反应性、可逆性的气道阻力增大和黏膜分泌增加为特征的复杂（性状）疾病，在世界范围内约有3亿人罹患该病。哮喘的发病机理极其复杂，涉及免疫、遗传、神经、内分泌等诸多学科。已有的研究表明，哮喘的发病呈现家族聚集现象，具有较强的遗传易感性，其遗传力在36%-79%之间，是众多复杂疾病中遗传力较高的，但其遗传方式并不符合简单的孟德尔定律。在本项目中，采取抽样策略，选择10个哮喘核心家系、30个病例和30个对照组个体，分别代表本项目的家系、病例和对照组。然后，采用靶向捕获技术，对肥大细胞级联激活信号转导网络中的所有35个蛋白的编码基因（共44个基因）进行定向捕获。第三，采用Illumina Hiseq 2000测序平台研究对目标基因区域进行重测序，测序深度约100×。最后，通过深入的数据挖掘分析，鉴定哮喘的易感基因或其中的SNP（Single Nucleotide Polymorphism ）和CNV（Copy Number Variation ）等。通过对90个个体的基因捕获区域的重测序研究，在44个基因的编码区中共鉴定出98个SNPs，未发现新的SNP。其中，通过病例——对照组统计学分析，在捕获区域的基因编码区发现6个接近统计学显著性差异的SNPs，分布在5个基因中，分别是Syk基因的rs112619650 (A→C)、RAC基因的rs201636005(T→G)、PLCγ基因的rs2229348(C→A)、PI3K基因的rs113613074(C→G)和rs199549932(G→A)、IL-13基因的rs140828306(G→A)。另外，在10个哮喘核心家系病例——对照中，也检测到上述5个基因的6个SNPs，但也未达到统计学意义上的显著性差异。另外，我们也试图基于6个SNPs进行单体型构建，但6个SNP之间未形成单体型结构。我们进一步对上述6个SNPs在NCBI dbSNP 数据库进行检索查找，发现它们均是MAF（最小等位基因频率）低于0.05%的罕见变异，提示如果进一步扩大样本量，有可能获得哮喘与上述6个SNPs关联的证据。