菌核病是粮油、蔬菜等多种农作物的重要病害,缺乏抗源是防治该病的最大困难。不具典型的基因对基因关系给研究该病的致病和抗病分子机制带来了困难。本研究在建立了拟南芥对菌核病抗性筛选方法的基础上,利用自建的激发标签突变体库(含50万个T1突变体)大规模筛选拟南芥抗病性增强或减弱突变体。对获得的突变体,经TAIL-PCR或质粒拯救技术进行基因克隆、测序和功能注释,得到侯选基因。同时对突变体进行遗传分析,明确是否与T-DNA标签共分离。PCR克隆侯选基因的基因组DNA,经克隆、转化相应突变体,进行功能互补分析,最终获得若干菌核病抗性相关基因明确其结构和功能。研究结果一方面可以为揭示类似于菌核病这类不具典型的基因对基因关系,而且缺乏抗源类型的病害系统的治理提供重要的理论依据,这是植物病理学研究中最薄弱的领域;另一方面可以为改良重要农作物对菌核病的抗病性提供可利用的抗病基因资源。
菌核病是粮油、蔬菜等多种农作物的重要病害,缺乏抗源是防治该病的最大困难。不具典型的基因对基因关系给研究该病的致病和抗病分子机制带来了困难。本项目在建立了拟南芥对菌核病抗性筛选方法的基础上,筛选获得了50株拟南芥抗病性增强的激活标签突变体。对获得的突变体,通过TAIL-PCR方法获得插入位点的侧翼序列,经测序、BLAST搜索明确了T-DNA的插入位点及其附近的基因。通过RT-PCR和T-DNA插入突变体对菌核病的敏感性分析确定了部分突变体的功能基因。同时采用抑制消减杂交的方法筛选获得了38个参与拟南芥抗菌核病反应的相关基因,这些基因的功能得到了T-DNA插入失活突变体敏感性分析和RT-PCR结果的验证。克隆了5个侯选基因,构建过表达突变体,其中At1g30280过表达突变体的感病性分析发现该基因确实参与了抗菌核病信号途径,同时还发现该突变体对ABA和盐敏感,这说明拟南芥抗菌核病的信号途径可能与ABA有关。本研究结果为揭示植物与核盘菌的互作机制提供重要的理论依据;另一方面可以为改良重要农作物对菌核病的抗病性提供可利用基因资源。