中文摘要：

草菇是一种高温型的食用菌，在常规低温冷冻（4℃）条件下，其菌丝会发生自溶而死亡，子实体会发软、液化和腐烂。草菇的这一特性严重地限制了草菇的生产、新鲜草菇的流通、低温冷冻保鲜和出口创汇以及草菇菌种的低温冷冻贮藏。因此，培育抗低温冷冻的草菇新品种就显得尤为重要。然而，草菇为同宗结合真菌，具有很复杂的生活史，菌丝没有锁状联合，杂种选择缺乏标记，这给草菇的杂交育种带来极大的困难。基因工程技术的发展，报告基因转化丝状真菌的成功，为解决草菇抗低温冷冻这一难题提供了可能性。抗冷冻蛋白(antifreeze proteins, AFPs)，具有降低水的冰点而没有明显改变水的熔点的独特性质，是一类具有降低生物体液冰点和抑制冰晶生长的生物活性蛋白，在低温生物的生存中起着重要的作用。目前，已从鱼类、昆虫、植物、真菌中分离了许多抗冷冻蛋白基因，而应用较多的是鱼类抗冷冻蛋白基因，它已广泛用于转化鱼类、植物等并得到了表达。然而据报道，某些昆虫抗冻蛋白具有非常高的生物活性，如从云杉卷叶蛾中克隆分离的抗冷冻蛋白，其活性是目前所有已知北极鱼抗冷冻蛋白活性的10-100倍，因而昆虫的抗冷冻蛋白基因（THP）日益受到重视。我们采用RT-PCR技术从Budworm（昆虫）的mRNA中分离得到THP基因（抗冷冻基因）,THP基因连接在T-Vector上形成质粒表达载体pGTHP4；以质粒pCAMBIA1301（含有35