中文摘要：

血液中循环肿瘤细胞（CirculatingTumorCell,CTC）直接来源于肿瘤组织，CTC的检测可用于肿瘤检测、疗效评价、复发及转移的监测，有效降低死亡率。CTC在血液中含量极少，高灵敏、快速、准确地测定外周血中CTC的含量，具有非常重要的意义。利用微流体芯片可以集成、自动化的优势，用微加工技术构建具有微坝结构的单细胞微反应池芯片，进行微坝、芯片内壁处理及捕获抗体标记，采用物理拦截及免疫反应相结合的多重捕获及分离方法，捕获的细胞在芯片上可继续培养以进一步鉴定CTC，建立集细胞分离、反应、检测、培养及鉴定为一体的全血中肿瘤细胞的高灵敏、高特异检测及鉴定方法，并在此基础上研究 CTC在肺癌及结直肠癌的肿瘤检测、药（疗）效判断及预后监测等方面的作用，为最终建立一种高效、方便的肿瘤检测、预后监测评估手段提供依据。

结论摘要：

恶性肿瘤是全世界范围内非正常死亡的主要死因之一，恶性肿瘤的转移复发则是导致患者死亡的主要原因，因此，如何有效、快速地预测及监测肿瘤复发及转移，及时、准确地采取相应的治疗措施，是降低肿瘤死亡率的有效手段。血液中的循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells,CTCs）由于其直接来源于肿瘤组织，具有肿瘤组织的特性，可以直接反应肿瘤的大小、类型，辅助判断存活时间，并可用于疗效评价、复发及转移的监测。由于外周血中CTCs含量稀少，建立从外周血中高灵敏检测CTCs的检测方法已经是近几年来的研究热点。本研究在免疫磁珠富集检测CTC的基础上，根据上皮来源的肿瘤细胞尺寸大于血细胞的原理，我们设计并制作了一种简单的高通量微流体芯片，制备的微流体芯片过滤微管道包含一组呈叉指排列的主管道和侧管道（80条主管道和81条侧管道），主管道和侧管道剖面尺度均为50 微米×50 微米，每条主管道均通过一组浅而窄的过滤管道（5 微米（高）×20 微米（宽））与两侧相邻的侧管道相通。由于过滤微管道的拦截作用，在优化流速及过滤微管道高度的条件下，可以将90%以上的肿瘤细胞捕获在微流体芯片管道内。并用该套CTC检测系统分析大量肺癌及结直肠患者临床样本，结果表明在97%的肺癌病人（60例）和所有结直肠癌病人（60例）外周血中检测到CTC，且这两类病人的CTC平均数分别为18.6mL-1 、33.4 mL-1，而在67例健康正常人中有7例正常人血样中可检测到阳性细胞，但大部分血样所含阳性细胞数未超过3个/mL，仅有一例为4个/mL。因此，微流体芯片技术分离CTC为区分非恶性疾病与肿瘤提供一种参考依据。另外，分析不同分期、治疗前后病人体内的CTC数量表明，CTC数量与肿瘤负荷、分期及患者疾病的进展情况密切相关，可以作为常规临床分期依据的补充和修正，并对患者的预后做出判断。因此，本研究中我们设计并制作了一种简单易用的高通量微流体芯片对肺癌及结直肠癌患者外周血CTC进行检测，该芯片是利用肿瘤细胞与血细胞尺寸大小的明显差异而设计的，可获得较高的捕获率。该芯片在可以在肿瘤的早期诊断、疗效监测及预后判断等方面具有良好的应用前景。