中文摘要：

早产是新生儿发病和死亡的重要原因,难以有效防治的根本原因是对分娩启动机制不清,尤其是妊娠末期子宫平滑肌（MSM）从静息向收缩的转化机制。T-型钙通道在动作电位形成和冲动传导中有重要作用,我们前期研究发现,T-型钙通道在妊娠末期人MSM细胞兴奋中有重要的起搏作用,但其在分娩启动中详细的分子离子机制仍不清楚。本项目在已有工作基础上,采用分子生物学、免疫组织/细胞化学、膜片钳及共聚焦等技术,以妊娠末期人MSM为标本,从组织、细胞、基因、蛋白等方面研究T-型钙通道表达、定位、通道特性及其变化；应用组织薄片新技术研究通道对MSM自发和非自发性活动的影响及其对兴奋-收缩耦联的作用机制；研究相关启动激素对该通道的作用及机制；深入探讨通道调控的胞内信号通路；以期阐释T-型钙通道在分娩启动中的作用机制及其与早产关系。为阐明分娩启动和早产机制提供实验依据,为研发抗分娩药提供新靶点和新思路,对预防早产有重要意义

结论摘要：

分娩的启动最终是由子宫平滑肌细胞的兴奋收缩引起的，这涉及到子宫平滑肌兴奋-收缩偶联的一些关键问题，目前对分娩启动起搏机制参与的离子通道生理学和分子特性仍不清楚。T-型钙通道在子宫平滑肌兴奋-收缩偶联中作用并不清楚，对此，我们以下方面进行了研究 1.子宫平滑肌主要表达Cav3.1和Cav3.2亚型，Cav3.1蛋白主要位于MSM细胞和血管平滑肌细胞，位于细胞胞膜和肌浆网区域；怀孕末期通道表达在大鼠和人均明显高正常，人妊娠末期不同分娩状态（足月临产、足月非临产、早产临产及早产非临产）通道mRNA及蛋白表达均无明显变化，但早产大鼠子宫平滑肌组织通道表达明显高于正常产子大鼠， 2.人妊娠末期通道激活失活曲线表现为通道激活较快，失活较慢，呈现较大window电流，通道半数激活电位为-50mV，半数失活电位为-47mV，显示明显的重叠区域，该电位区域和人妊娠末期MSM细胞的膜电位十分吻合，且通道激活可诱发膜电位的部分去除极，加速动作电位的形成。 3. T-型钙通道明显介导子宫平滑肌自发性收缩的频率，在高表达（如早产）状态时，抑制T-型钙通道则能显著降低子宫平滑肌自发性收缩的频率和幅度；氧化应激（H2O2诱发）能明显激活T-型钙通道介导了子宫平滑肌自发性收缩频率的加快和幅度的增强。 4. 激活PKC信号通路增强T-型钙通道电流参与了PGF2a增强子宫平滑肌节律性收缩的作用；而激活PKA信号通路抑制T-型钙通道可能参与利托君抑制子宫节律性收缩的作用；H2O2氧化激活CaMKII则可能直接使T-型钙通道磷酸化激活，是其加快子宫平滑肌自发性收缩频率的作用机制。 5. 药理性阻断T型钙通道能明显降低LPS诱发大鼠早产的发生率。总之，本研究发现T-型钙通道异质性表达于子宫平滑肌，在MSM细胞的AP产生和随后的电兴奋收缩活动起重要的作用，药理性阻断T型钙通道抑制早产，为临床防治早产提供新的靶点。