中文摘要：

本研究拟根据仅野生型P53蛋白能与特异DNA序列结合从而调控靶基因转录的机制，以及大多数肿瘤细胞中均为突变型P53这一特点，结合反义RNA技术，构建一个启动子区含P53特异结合DNA序列的"反MGMT基因"，根据野生型P53蛋白在肿瘤组织和正常组织中的存在与否，决定MGMT基因反义RNA的转录起始，以此特异性调控MGMT在不同组织中定向表达。从而在特异提高肿瘤细胞对烷化剂敏感性的同时增强正常细胞对烷化剂耐受。为临床上特异逆转肿瘤耐药、并同时降低烷化剂毒副作用的难题提供全新的解决思路；并且为基因表达调控和进一步开展肿瘤基因治疗作有益的探索。

结论摘要：

为使DNA烷化损伤修复酶MGMT特异地在肿瘤细胞中失能，本研究利用肿瘤中P53多已突变的特点和RNAi技术，构建siRNA表达受野生型P53调控的载体，以实时定量RT-PCR、Western杂交和MTT等方法在转录、翻译和功能水平检测MGMT表达及细胞对烷化剂BCNU的耐药指数。结果，筛选到2段有效沉默MGMT基因的siRNA表达序列，成功构建了含野生型P53识别元件的目的载体。转染Hela细胞（肿瘤）后MGMT表达抑制率达55%；BCNU剂量>50×10-6μg/ml时转染组较对照组剂量-抑制曲线明显左移，IC50分别为70和240×10-6μg/ml，敏感性提高3.5倍。各组HEK293细胞（正常）野生型P53表达无差异，转染组MGMT表达明显抑制，BCNU敏感性也显著增加。研究证实突变型P53蛋白不能关闭siRNA生成、可有效干扰MGMT表达并逆转肿瘤细胞烷化剂耐药；有望通过增加或稳定胞质中野生型P53蛋白等于近期完善关闭siRNA表达的研究。类似研究国内外尚无报道，是调控基因定向表达、逆转肿瘤烷化剂耐药的一个新途径和实践积累，对基础研究和实际应用均有重要意义。