中文摘要：

本研究拟构建抗CD3单链抗体-寡9精氨酸(ScFVCD3-9R)负载Bcl-6特异性小干扰RNA，注入T-AChR免疫的EAMG小鼠模型体内，利用T细胞表面标志分子CD3 特异性单链抗体，介导Bcl-6（Tfh细胞特异性转录因子）特异性的小干扰RNA，靶向抑制Tfh细胞分化及其介导的抗原特异性B细胞生成与活化，在免疫反应的效应阶段抑制免疫应答。通过观察这些小鼠的临床特征，生发中心数目和B细胞亚群，血清中抗AChR抗体类型以及肌肉中AChR含量等免疫学指标，来鉴定ScFVCD3-9R/Bcl-6-siRNA对EAMG的治疗作用。并观察模型中Tfh细胞的效应因子ICOSL、IL-21及B细胞重要活化因子BAFF及其受体介导的下游通路NIK、IKK-A、Bcl-2 、Bcl-xL、Bax和TRAF3蛋白表达和磷酸化水平，从T-B细胞协作活化角度揭示这一方法对EAMG的治疗机制。

结论摘要：

滤泡辅助性T细胞(Tfh)是辅助B细胞抗体生成的重要T细胞亚群，其与自身免疫病的发病密切相关。B细胞淋巴瘤因子6（Bcl-6)、IL-21分别是Tfh细胞的关键转录因子和代表性细胞因子。我们拟构建Bcl-6短发夹RNA慢病毒表达载体，用其干预实验性重症肌无力模型，观察疗效并探讨相关机制。我们的研究结果显示CD4(+)CXCR5(+)PD-1(+) Tfh细胞、Bcl-6和IL-21在重症肌无力模型鼠的表达丰度显著高于CFA免疫的对照鼠；此外，重症肌无力模型鼠Tfh细胞的表达频率与血清抗乙酰胆碱受体抗体及其亚型的滴度呈正相关。在重症肌无力模型鼠的进展期静脉注射Bcl-6RNA干扰慢病毒表达载体可以有效减轻肌无力严重程度，减少Tfh细胞频率、Bcl-6和IL-21的表达水平。我们还探讨了RNA干扰敲除Bcl-6对Th1/Th2/Th17/Treg细胞亚群的影响，结果显示体内敲除重症肌无力模型鼠Bcl-6除了减低了Tfh细胞频率，还促进Th1（转录因子T-bet和代表性细胞因子TFN-γ）和Th2（转录因子GAtA-3和代表性细胞因子IL-4）表达，而对Th17（转录因子RORγt和代表性细胞因子IL-4)和调节性T细胞即Treg（转录因子FoxP3)无显著影响。我们的研究表明Tfh细胞可能是辅助B细胞产生致病性抗体-抗乙酰胆碱受体抗体而导致重症肌无力发病的关键T细胞亚群之一，Tfh细胞的转录因子Bcl-6可能作为治疗重症肌无力及其它抗体介导的自身免疫病的新候选靶点。