中文摘要：

套细胞淋巴瘤起病隐袭，对放疗、化疗均不敏感，预后很差，目前尚无标准治疗。它的分子特征是几近100%存在CyclinD1的过度表达，而这也是其增殖失控、对放疗抗拒、对化疗耐药的原因。本研究拟采用FDA批准用于临床试验的、可生物降解的聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）纳米粒子作为基因传递系统，将构建的CyclinD1短发夹环RNA(shRNA)产生质粒pSilencer 3.1-H1 hygro导入套细胞淋巴瘤Mino细胞。利用该质粒能在哺乳动物细胞内长期、稳定表达shRNA，后者又能被进一步加工形成小干扰RNA(siRNA)的特性，诱发靶向CyclinD1的基因沉默，高效、特异、稳定地抑制套细胞淋巴瘤细胞中CyclinD1的表达，最终导致肿瘤细胞死亡。通过体外细胞试验和体内动物试验,观察单用基因治疗及联合化疗药物阿霉素的抗肿瘤作用，并探讨其影响肿瘤细胞信号转导的分子机制。探索采用RNA干扰技术开展套细胞淋巴瘤基因治疗的新途径，为下一步开发选择性强、使套细胞淋巴瘤达到分子生物学缓解、高效低毒的基因治疗药物打下坚实的基础。

结论摘要：

本课题通过基因重组技术构建针对人cyclin D1基因的特异性小发夹RNA（small hair-pin RNA， shRNA）真核表达载体，采用RNA干扰技术，运用壳聚糖作为基因治疗载体转染人髓性白血病K562细胞，体外观测其对cyclin D1基因的沉默作用以及RNAi后对K562细胞体外抗肿瘤效应，探索人髓性白血病基因治疗崭新的、有效的方法。结果表明1.壳聚糖能有效地将pDNA转入真核细胞内，其持续释放pDNA并使之稳定表达。因此，壳聚糖是一种有效的基因治疗载体。2. 根据双酶切及DNA测序分析鉴定结果，我们成功构建了可表达shRNA结构靶向cyclin D1基因的RNA干扰系统，为研究其对cyclin D1基因表达的抑制作用打下基础，同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法。3.所构建的可表达小发夹RNA靶向cyclin D1基因的RNA干扰系统，以壳聚糖为基因治疗载体能有效下调K562细胞cyclin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；改变K562细胞周期各期比例，并能诱导K562细胞凋亡；与ADM协同作用，增强ADM对K562细胞的抗肿瘤作用。