中文摘要：

本实验室已完成了本项目的前期试验研究，筛选出一个能模拟丙型肝炎病毒（HCV）包膜蛋白E2配体功能区的9肽，建立了含有该9肽及9个具有高度交叉抗原性的高变区1（HVR1）模拟表位和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位，以及以缺失疏水性羧基末段的HCV E2为支架的融合蛋白在CHO细胞分泌性表达和初步纯化工艺。在此基础上，本项目拟建立更高效的亲和层析纯化方法，检测重组融合蛋白与靶细胞的结合活性；以水包油乳剂

结论摘要：

将我们筛选出的一段能模拟HCV包膜蛋白E2配体功能区的9肽和5段具有交叉抗原性的高变区1（HVR1）模拟表位以及缺失疏水性羧基末段的HCV E2蛋白的编码基因融合，构建重组真核表达质粒pCI-HCVmp，转染293T细胞，可检测到细胞内和细胞培养上清中的融合蛋白，以该质粒肌肉注射免疫小鼠，可检测到高水平的融合蛋白抗体和抗各模拟表位的抗体。分别构建和H77、J6、J4和Con-1株HCV的全长包膜蛋白表达质粒，与慢病毒包装质粒共转染293T细胞，构建HCV假病毒颗粒（HCVpp），作为评价小鼠血清中和作用的模型。结果，小鼠血清可有效中和检测的四株的感染性，中和作用与抗体效价正相关。在此基础上，构建以谷氨酰胺合成酶为筛选标记的真核表达质粒，转染CHO细胞，以谷氨酰胺合成酶抑制剂MSX筛选得到稳定分泌表达融合蛋白的细胞株，对该细胞株进行无血清悬浮培养，建立了能良好悬浮生长的细胞株，对培养上清进行超滤浓缩后再进行离子交换和凝胶过滤，纯化得到模拟表位和E2融合蛋白，用ISA720为佐剂免疫小鼠，抗体滴度可达106，可高效中和四株HCVpp的感染性。本研究为发展有效的模拟表位丙肝疫苗提供了一定依据