利用基因芯片技术对中国和曼地亚红豆杉植株叶片以及中国红豆杉细胞在茉莉酸甲酯(MJ)诱导前后有关miRNA基因表达差异进行了研究,均筛选出了26个表达显著上调和22表达显著下调的miRNA基因。中国红豆杉小RNA测序发现有56个保守的miRNAs,它们分属于23miRNA 家族,另外2个是非保守的miRNAs。我们发现miR168,miR169表达水平发生降低,而miR164和miR390表达水平发生升高,我们还对受MJ诱导的主要保守miRNAs的靶基因进行了预测。我们利用osa-mir164e,ath-mir165a,osa-mir169d载体对紫杉烷13α-羟基化酶(13OH)阳性转基因烟草植株进行了转化,发现只有169d可使GUS被干扰掉,但该结果无法重复。我们又开展了osa-mir415正义、osa-mir169d正、反义基因以及东北红豆杉13OH基因对曼地亚红豆杉细胞单独和共转化工作,发现osa-mir415正义基因可显著降低C-14氧取代紫杉烷总含量。由于C-14氧取代紫杉烷与紫杉醇竞争相同的底物,今后有望通过利用miRNA抑制C-14氧取代紫杉烷生成来提高细胞紫杉醇的产量。
英文主题词Taxus;Taxoids;microRNA;Gene expression;Regulation.