脊髓慢性受压后发生一系列变化,同慢肝纤维化、SARS肺纤维化相似,其变化的结局是损害部位纤维化,但脊髓纤维化未引起足够重视,脊髓受压后由痿证变为痉证多为痰瘀互结,经络不通、气血不畅,中医认为久病入络,久病多痰多瘀,中药在活血化瘀、抗纤维化方面有优势,在抗脊髓纤维化方面值得研究。通过建立兔脊髓慢性受压动物模型运用分子生物学、脊髓微血管显影、免疫组化、电镜等技术和方法观察颈髓慢性受压后星形胶质细胞的状态、胶原纤维酸性蛋白mRNA、神经丝蛋白表达、脊髓组织超微结构等反映脊髓纤维化及神经元微环境改变的指标,选择脊髓组织PGI2/TXA2、微血管显影、血管内皮生长因子表达等反映脊髓血供状况的指标,应用病理图象系统分析,探讨脊髓受压后纤维化程度、神经元微环境改变与脊髓血供的关系,应用活血软坚方改善血偱环、抗纤维化观察对受压脊髓血循环、脊髓纤维化、神经元微环境的影响,为中药治疗脊髓受压疾病提供理论依据。
Spinal cord;GFAPmRNA;Fibrosis;Microvssel;Huoxue Ruanjian Formula
通过建立兔脊髓慢性受压动物模型运用分子生物学、脊髓微血管显影、免疫组化、电镜等技术和方法观察颈髓慢性受压后星形胶质细胞的状态、胶原纤维酸性蛋白mRNA、神经丝蛋白表达、脊髓组织超微结构等反映脊髓纤维化及神经元微环境改变的指标,应用活血软坚方治疗观察对受压脊髓血循环、脊髓纤维化、神经元微环境的影响,结果显示能改善血循环、抗纤维化,改善神经元微环境的影响。 1.慢性受压兔脊髓组织中的TXB2/PGT2、VEGF的含量,脊髓组织微血管显影。脊髓慢性受压后,脊髓组织的TXA2/PGI2调节失调,脊髓微血管显影减少,分布短小,血循环障碍。活血软坚方组、中药活血方组能调节TXA2/PGI2,促进VEGF表达,脊髓组织微血管显影面积大,有促进血管修复,改善血循环作用,并能改善神经元微环境。 2.兔脊髓组织中的胶原纤维酸性蛋白mRNA、胶原纤维酸性蛋白表达。研究发现脊髓慢性受压后,空白正常组GFAP阳性细胞和胶原纤维酸性蛋白mRNA表达较低,但对照组有较强的表达,表明损伤后星状胶质细胞增生,胶质瘢痕增多,中药活血软坚方治疗组GFAP表达少于对照组,活血软坚方有抑制星形胶质细胞增生和GFAP表达,减少疤痕形成的作用。 3.尼氏体染色法观察脊髓细胞和星形胶质细胞的改变观察到兔颈脊髓慢性持续受压后出现脊髓灰质神经元萎缩、脱失,白质广泛脱髓鞘改变,受压严重出现明显纤维化改变。活血软坚方组、中药活血方组神经元计数均比造模对照组多,差别有统计学意义(P<0.05)。 4.采用免疫组化观察神经元神经蛋白的变化;采用透射电镜方法观察神经细胞的超微结构变化。中药活血软坚方组神经丝染色显示较造模对照组好,提示中药有促进神经元NF表达,改善神经元微环境,恢复细胞间联系的作用。电镜观察造模对照组见神经元细胞核缩小,核膜“裂隙”样改变,胞核颗粒样改变,核仁不清,粗面内质网脱粒并减少,线粒体少见,细胞器裂解形成空洞。髓鞘板层间大面积解离,有的披裂、板层结构散乱,形成空泡结构。轴浆内各种细胞器崩解。中药活血软坚方治疗组见神经元体积稍变小,大部分神经元形态基本正常,但有部分出现核膜不清,粗面内质网发生脱粒现象,线粒体肿胀。髓鞘发生脱髓鞘改变,髓鞘板层结构紊乱。轴突结构基本正常,可见微管、微丝及线粒体等细胞器,部分见有细胞器聚集。中药活血软坚方通过改善受压脊髓血供、脊髓微血管,抗