中文摘要：

杜氏肌营养不良(DMD)是一种致死性X连锁隐性遗传病，是肌营养不良症中最常见和最严重的类型。该疾病是由于Dystrophin基因的突变造成Dystrophin蛋白的缺失或功能丧失所致，目前临床上对该病尚无有效的治疗手段，而基因治疗的兴起为DMD治疗带来了新的希望。本研究利用多潜能性干细胞（iPS cells）作为DMD基因治疗的靶细胞，以逆转录病毒诱导DMD患儿的羊水细胞成为DMD特异性iPS细胞，利用我室开发的新型非病毒核糖体区基因打靶载体将Minidystrophin基因定点整合至iPS细胞基因组中，筛选稳定表达Minidystrophin蛋白的iPS细胞克隆，再将其诱导分化为成肌细胞，为采用ex vivo（间接体内）途径进行DMD基因治疗研究奠定坚实的基础，同时也为利用患者自体细胞诱导的iPS细胞进行DMD的基因治疗开辟一条新的思路。

结论摘要：

杜氏肌营养不良（DMD）是由于Dystrophin基因的突变造成Dystrophin 蛋白的缺失或功能丧失所致。本研究利用逆转录病毒诱导系统，将杜氏肌营养不良（DMD）患者来源的皮肤成纤维细胞诱导成为DMD疾病特异性多潜能性干细胞（iPS cells）。利用我室开发的新型非病毒核糖体区基因打靶载体pHr-NL携带Minidystrophin 基因，构建了DMD基因治疗打靶载体pHrnlCDysG，进而对DMD特异性iPS细胞进行基因打靶和定向分化研究。实验结果表明，诱导产生的DMD疾病特异性iPS细胞具有多潜能性。核糖体基因区靶向载体可有效将外源治疗基因定点靶入ES细胞及MSC细胞的rDNA基因区。由于pHrnlCDysG载体较大等原因，打靶iPS细胞的效率较低，目前仍在进行筛选Minidystrophin 基因定点整合iPS细胞克隆及定向分化方面的工作。此外，对于治疗基因中一般包含多个开放阅读框，是否存在下游开放阅读框的表达，从而造成基因治疗安全性的问题，我们研究了真核生物多顺反子结构mRNA的翻译起始，结果证实真核生物多顺反子结构mRNA可翻译出不同蛋白质，其效率依赖于起始密码子的序列背景和间距。该结果为本课题以及其他基因治疗研究的安全性提供了参考。