Npro蛋白是瘟病毒属成员特有的自体蛋白酶,具有拮抗宿主Ⅰ型干扰素产生的功能。此前我们通过猪瘟病毒标记和活细胞成像技术首次发现,Npro蛋白具有核定位现象,但Npro蛋白的核定位分子机制及其生物学功能目前尚不清楚。本项目拟利用插入TC分子标签的猪瘟病毒实时示踪Npro蛋白的入核过程;通过被动扩散、选择性易位试验确定Npro蛋白的入核方式;利用绿色荧光蛋白标记和截短表达界定Npro蛋白的核定位信号;通过 GST pull-down、免疫共沉淀、哺乳动物细胞双杂交、激光共聚焦、RNA干扰等技术筛选和鉴定与Npro蛋白相互作用的细胞核蛋白;通过上调和下调表达研究细胞核蛋白对Npro蛋白核定位、Ⅰ型干扰素应答和猪瘟病毒复制的影响,以及Npro蛋白对细胞核蛋白功能的影响,从而阐明Npro蛋白核定位的分子机制和生物学新功能,为揭示猪瘟病毒复制和致病机制提供科学数据。
英文主题词classical swine fever virus;Npro protein;nuclear localization;virus-host interaction;interferon