我们发现OIF存在于正常的腺垂体中,而且OIF存在于腺垂体ACTH分泌细胞中,双色原位杂交和免疫组化分别从mRNA水平和蛋白水平证实了ACTH和OIF共存。实验结果表明OIF在垂体中的作用较为复杂。从OIF-MBP融合蛋白对GH3细胞GH表达的影响来看,ACTH细胞分泌的OIF在垂体对其它垂体分泌细胞也同时有着旁分泌、邻分泌的作用。我们构建了OIF真核表达的载体并表达和纯化了真核蛋白,构建了OIF的逆转录病毒的载体并包装了病毒,鉴定了滴度。我们对OIF的启动子区和第一内含子区的序列进行了分析,在M-OIF启动子区和第一内含子区预测出了五个糖皮质激素受体反应元件。凝胶阻滞实验证实糖皮质激素受体能与这五个GRE结合,竞争结合实验则证明了结合的特异性。在这五个GRE中,启动子区的两个反应元件结合力较强,而内含子区的三个反应元件结合力较弱。报告基因的研究表明,转染了含启动子区两个GRE的PGL3载体和含内含子区三个GRE的PGL3载体的ATT20细胞,在加入地塞米松的情况下,其荧光素酶的表达都增加了2-3倍,说明五个GRE都有增加OIF转录活性的作用。
英文主题词Osteoinductive factor(OIF); pituitary; location; function; promoter analysis