中文摘要：

本课题组前期工作中采用酵母双杂交等方法,筛选并确定了α1A-AR可与细胞骨架蛋白Filamin-C相互作用，预实验结果显示Filamin-C可能具有调节表达α1A-AR的细胞内MAPK信号转导通路的重要功能，这一结果国内外尚未见报道。本课题拟从以下几个方面系统地进行Filamin-C与α1-AR三种亚型相互作用的功能意义及机制研究。确定α1-AR三种亚型与Filamin-C蛋白相互作用的结合域；利用细胞生物学,分子生物学和药理学方法，结合激光共聚焦成像、放射配基结合分析等方法研究Filamin-C对α1-AR三种亚型在细胞分布、亚细胞定位的影响以及受体密度、亲和性等药理学特性的影响；结合细胞信号转导的相关工具药，研究Filamin-C对α1-AR三种亚型信号转导通路的调节。本项目的研究不但将深化对α1肾上腺素受体的认识，丰富受体理论，而且为寻找新的药物作用靶点，进行新药开发提供理论依据。

结论摘要：

本课题组前期应用酵母双杂交筛选分别观察了三种蛋白与α1A-，α1B-，α1D-AR在酵母细胞中的作用。进一步深入研究得出如下结论1. FLNC?的C末端含有48aa的蛋白片段与三种亚型α1-AR胞浆内C末端在酵母细胞中均有结合作用。FLNC全长可以影响α1A-AR PE激动时在HEK293A细胞中的定位；FLNC的C末端蛋白片段与全长的α1A-AR完全共定位；GST-pull down与免疫共沉淀研究结果进一步确证FLNC的C末端（517aa）蛋白片段与全长的α1A-AR存在相互作用。2. 全长FLNC可以同时增强PE激动α1A-AR引起ERK1/2与p38磷酸化的作用，而FLNC的片段仅增强PE激动α1A-AR引起的ERK1/2磷酸化。PKC参与了以上过程。PE刺激α1A-AR的情况下，HEK293A细胞中的F-actin发生重排，FLNC片段可以抑制此重排而全长FLNC对其无明显影响。3. 由放射配基结合实验发现在HEK293A细胞中Filamin-C蛋白能增加胞膜上α1A肾上腺素受体密度及减少α1A肾上腺素受体与配体的亲和力。