课题研究结果证明,绵羊卵母细胞体外成熟培养液中添加VEGF显著提高卵母细胞成熟和核成熟率,VEGF及其受体Flt-1、KDRmRNA 表达增高,引起Raf、MEK和MAPK mRNA和蛋白表达增高,培养后期,VEGF及其受体、MEK、MAPK表达降低;添加U0126降低卵母细胞成熟率、VEGF及其受体、Raf、MEK、MAPK mRNA表达增高;培养24h时MEK、Pho-MEK和MAPK蛋白表达都高于对照组;同时添加VEGF和U0126后卵母细胞核成熟率明显提高,VEGF及其受体、MAPKmRNA表达量升高,Raf和MEKmRNA表达量减少;构建绵羊VEGF基因的三个siRNA干扰载体,利用绵羊成纤维细胞和颗粒细胞对载体进行筛选,证明载体PGC-2干扰效率最高。本课题确定了VEGF在促进卵母细胞成熟过程中的主要受体为KDR,揭示MAPK信号通路和VEGF作用通路在促进绵羊卵母细胞体外成熟过程中存在着明显的负反馈调节作用。本研究中涉及的VEGF促进卵母细胞成熟过程中二级信号传导及信号级联放大作用的研究在该领域中属国际前沿课题,结论对阐述胚胎发生和发育机理有重要的理论意义和学术价值。
英文主题词Vascular Endothelial Growth Factor(VEGF); Mitogen-activated protein kinase (MAPK);signal transduction;oocytes;ovine