中文摘要：

慢性牙周炎中，破骨细胞前体的募集、分化和激活是造成牙槽骨吸收的基本效应细胞机制，但牙周炎局部的炎症微环境对破骨细胞的影响仍是有待回答的问题。巨噬细胞是慢性炎症组织最主要的浸润细胞之一。进入组织的巨噬细胞主要有两种激活（极化）模式M1型极化主要诱导组织破坏，M2型则主要诱导组织重塑与修复，但巨噬细胞极化在牙周炎骨吸收中的作用和机制还未阐明。为此，申请人近期参与了巨噬细胞激活模式调控的研究，结果以封面故事发表于《Cancer Res》（共同第一作者）。本项目拟在以往工作的基础上，采用牙周炎动物模型和牙周炎患者的龈组织标本，利用ELISA、流式细胞仪和基因克隆转染等技术系统研究牙周炎骨吸收中巨噬细胞极化的改变，明确巨噬细胞极化改变与破骨细胞募集和激活之间的关系，探讨巨噬细胞极化影响破骨细胞和骨吸收的分子机制。这些研究有助于进一步认识牙周炎时骨吸收的细胞和分子机制，为牙周炎的防治提供新的思路。

结论摘要：

牙周炎是人类常见病。本项目的研究目标以及研究内容是以动物模型和牙周炎患者为对象，利用多种研究手段，深入研究牙周炎病程进展中巨噬细胞激活模式的改变及其与疾病进展的关系，初步阐明其分子病理机制，探讨人工调节巨噬细胞激活模式及其在牙周炎治疗中的潜在价值，为牙周炎的治疗提供新的思路。项目基本按照原定计划实施。实施过程中就细菌组分对巨噬细胞的调控作用和分子机制取得了一定的研究成绩。首先，研究了Notch信号途径对破骨细胞发育的调控作用。通过条件性RBP-J基因敲除，发现Notch信号阻断的鼠股骨中骨小梁减少，并且骨髓中破骨细胞数目增多。然而剔除鼠骨髓中成骨细胞功能正常。说明在骨髓中剔除RBP-J促进了破骨细胞的分化，从而引起骨量减少。RT-PCR检测发现破骨细胞分化过程中关键调控因子TRAP基因的表达明显增加。以上这些结果表明RBP-J是破骨细胞分化的关键性的负性调控因子。其次，研究了Notch信号调控细菌脂多糖对巨噬细胞的激活作用和机制。鉴定了一组可能受Notch信号调控的microRNA，并用RT-PCR发现并证实miR-125a是Notch信号在巨噬细胞的直接靶基因。进而证实Notch信号可以通过miR-125a提高髓系分化中细胞的生存，而miR-125a可以通过FIH和IRF4促进巨噬细胞的I型极化并抑制其II型极化。通过体内实验，发现过表达miR-125a可以有效抑制移植肿瘤的生长。这些研究不仅具有理论意义，还具有潜在的应用价值。第三，发现Notch信号调控SIRP1a，影响巨噬细胞对病原体的吞噬。发现SIRP1a的表达水平与巨噬细胞的吞噬能力相关。巨噬细胞中表达SIRP1a可能与巨噬细胞极化状态有关 M1型极化巨噬细胞的SIRP1a表达水平无明显变化，但M2极化的巨噬细胞可以明显增强SIRP1a表达。利用体外报告基因实验我们发现，Notch的激活可以抑制SIRP1a启动子的转录激活活性；同时，利用实时定量RT-PCR和Western Blot我们在mRNA水平和蛋白质水平证实，Notch激活可以抑制SIRP1a的表达。这些结果提示SIRP1a是Notch信号的下游分子，可能在巨噬细胞的抗微生物免疫中发挥重要作用。这些研究对于阐明巨噬细胞激活模式的改变及其与疾病进展的关系，了解其分子病理机制，探讨人工调节巨噬细胞激活模式及其在牙周炎治疗中的应用具有潜在价值。