中文摘要：

我们业已发现miR-223通过IGF1R调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞浸润转移，而晚近研究提示后者在NSCLC EGFR-TKI耐药中有重要作用，但miR-223是否通过该通路参与该耐药机制尚不清楚。本项目拟在分选出NSCLC干细胞及诱导耐厄洛替尼细胞的基础上，检测厄洛替尼作用前后细胞内miR-223及IGF1R/ PI3K/ Akt信号分子的变化，分析miR-223的表达水平与IGF1R/ PI3K/ Akt分子变化的相关性及其与厄洛替尼作用的关系；分别对miR-223实施过表达或基因沉默以及阻断PI3K/Akt信号通路，体内外实验探讨miR-223调控IGF1R/PI3K/Akt在NSCLC 厄洛替尼耐药中的旁路活化机制及其关键靶点，为改善NSCLC等恶性肿瘤的EGFR-TKI分子靶向治疗的效果提供新的思路，具有重要的理论意义及临床应用前景。

结论摘要：

表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）的应用，显著改善了非小细胞肺癌（NSCLC）预后，但其耐药问题亟待解决。本项目在前期工作基础上，首先采用大剂量冲击联合小剂量维持的方法，建立了人NSCLC erlotinib耐药持续状态细胞PC9/ER，其耐药指数为734.84±69.02nM，是亲代细胞的37.4倍；EGFR基因突变检测未发生常见的T790M突变和c-Met扩增。同时，为了深入探讨NSCLC EGFR-TKI耐药机制，我们成功分离了肺癌干细胞样细胞（PC9/CD133+细胞）。PC9/CD133+细胞对erlotinib的耐药指数是PC9细胞的69.9倍。在这两种耐药细胞中，miR-223表达下调（p < 0.05），而胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）mRNA表达及蛋白水平上调；过表达miR-223后，p-IGF-1R、p-Akt及p-70S6K蛋白表达明显降低，erlotinib耐药得到有效改善。接着，我们成功构建了高表达miR-223的慢病毒载体，转染PC9和PC9/ER细胞并在裸鼠体内成瘤，发现体内高表达miR-223后IGF-lR mRNA和p- IGF-lR蛋白水平都受到了抑制，其下游的p-Akt、p-p70S6K6蛋白也受到明显抑制，体内实验结果与细胞水平一致。最后，我们正收集临床EGFR-TKI耐药患者标本（已收集5例），拟在临床标本中验证IGF-1R-AKT-70S6K信号通路分子表达变化。我们的结果表明，在erlotinib耐药细胞中miR-223下调导致IGF-1R/PI3K/AKt旁路活化是EGFR-TKIs耐药的重要机制，为EGFR-TKIs耐药机制的探讨、寻找新的干预措施，提供新了的思路，具有重要的理论意义及临床应用前景。