中文摘要：

重症急性胰腺炎（SAP）是临床常见危重症，尤其并发急性肺损伤（ALI）及急性呼吸窘迫综合征和多器官功能障碍综合征后死亡率甚高。尚无确切的防治方法。已经认识到SAP-ALI与细胞因子的"级联反应-瀑布样释放"有关，但同类病人采取同样的治疗其效果竟可能"大相径庭"，且机理不清。我们结合全身炎症反应-脓毒症-基因多态性的研究成果，以SAP病人、模型猪为研究对象，采用微小RNAs（miRNA）芯片技术筛选出与SAP发生发展密切相关的miRNA，实时定量PCR验证；借助生物信息学分析和数据库文献检索技术，预测miRNA的靶基因，并通过RT-PCR、Western blot、免疫组化验证；用细胞培养与细胞转染技术将预测的特定miRNA转染到单核细胞中，观察与分析细胞表型及炎性因子表达变化，从而实现对SAP-ALI进行miRNA水平上的基因表达与功能调控网络的深入研究。为防治SAP-ALI提供新思路。

结论摘要：

重症急性胰腺炎（SAP）是临床常见急危重症，发病机制复杂，病情凶险，预后差。急性肺损伤（ALI）并发ARDS，是SAP患者早期死亡的主要原因。miRNA是一类非蛋白质编码的、高度保守的、长度约为22nt的单链小分子RNA，涉及疾病各个层面的基因活动调节。应用基因芯片技术高通量筛选10例SAP-ALI患者与10例正常人血清之间差异性表达的miRNA，应用RT-PCR法对差异性表达显著的miRNA在大鼠肺组织中的表达进行定量验证，然后用生物信息学方法预测特异性miRNA与SAP-ALI相关的靶基因，确立与分析其与特异性miRNA间的相关性。研究发现，SAP-ALI患者与正常人血清间存在47种特异性miRNA，如miR-224、smiR-195、miR-20a等。表达上调23种，下调24种，其中差异最为显著的是miR-195、miR- 20a、miR-224、miR-335四种miRNA，前二者显著上调，后二者显著下调。接着，复制大鼠SAP-ALI模型，用RT-PCR对大鼠肺组织上述4种miRNA表达进行验证，其变化规律与生物芯片结果一致。然后，采用生物信息学方法预测miR-195和miR-20a共同靶基因为IL-8，而miR-224和 miR-335共同靶基因为IL-11；PCR法对大鼠肺组织IL-8和IL-11的表达进行检测，结果显示IL-8在SAP-ALI较对照组大鼠肺组织中含量显著上调，而IL-11则显著下调，二者均与相应miRNA的表达呈正相关，在发病12h与24h的差异并不明显。此外，收集大连地区3家三级甲等医院收治的SAP-ARDS患者60例，观察疾病特征及大黄附子汤的临床疗效，发现大黄附子汤可降低SAP-ARDS患者体内炎性介质，改善氧合功能，降低死亡率，明显改善SAP-ARDS患者的预后。综上，在SAP发生发展过程中，确实存在着miRNA的差异表达。差异表达的miRNA可能决定ALI的发生发展，从而影响SAP的预后，其作用机制可能与网络调控下游炎性介质表达有关。另外，临床研究表明大黄附子汤对SAP-ARDS患者有其临床疗效，但是否与某些关键性miRNA有关，或存在什么样的关系值得进一步深入研究。本研究将对探索miRNA网络调控在SAP-ALI发生发展中的作用，从全新的角度探讨其发病机制，为临床SAP靶向治疗及预后标志物的确定提供理论依据。