中文摘要：

构建猪胚胎骨骼肌shRNA文库并在此基础上识别与骨骼肌生长发育相关新基因，是提升RNAi应用效率及发掘新基因的一种重要途径。在本研究中，首先以本室已构建的pcDNA3.1 载体为骨架，利用人源H1和鼠源U6启动子，构建出具双向启动子的新型siRNA表达载体pH1U6-GFP。经载体质粒转染细胞及RNAi试验检测，pH1U6-GFP载体的抑制效率提高约60％。进而，借助本室已构建的猪胚胎骨骼肌cDNA文库和获得的在骨骼肌生长发育阶段具差异表达基因和ESTs信息，人工合成siRNA，连接入pH1U6-GFP siRNA表达载体，并转染入大肠杆菌DH5α，分别构建出骨骼肌生长发育相关基因shRNA文库和随机shRNA文库。RNAi试验和阳性克隆子测序表明，所构建的shRNA文库具有覆盖率广、载体表达量及抑制效率高的特点。而后根据上述结果，初步确定8个重要候选基因MuRF1、MuRF2 、MuRF3、MKK3、MKK6、TMOD1、IRS1和PRDM16等，并对其基因组结构和遗传特性进行详尽研究。本研究为猪骨骼肌重要发育阶段分子调控机理的深入研究和产肉性状的候选基因挖掘提供了科学基础。