中文摘要：

人卵巢癌cDNA表达文库中所发现的肿瘤抗原基因及表达蛋白（OVA66）在肿瘤组织中呈特异性高表达，基因定位于第8号染色体，编码蛋白为66kDa。本研究将进一步弄清该基因和蛋白的组织表达谱特征和亚细胞定位、分布特点。利用基因、蛋白芯片，分析被转染OVA66基因或特异抑制该基因表达的siRNA的不同细胞中基因和蛋白的差异性表达和细胞生物学行为变化，并结合酵母双杂交等技术着重探讨蛋白的功能和作用机制，揭示其与肿瘤发生、发展的相互关系。同时应用OVA66融合蛋白和抗体建立定量ELISA法，确认血清抗体检测与临床应用价值；并利用计算机软件分析技术，筛选OVA66蛋白中结合HLA-A2的特定肽分子，诱导、制备HLA-A2限制的特异识别OVA66蛋白中肽分子的CTL系，通过稳定结合、特异杀伤等试验鉴定肿瘤特异的抗原肽，为肿瘤的肽疫苗研究奠定基础。

结论摘要：

应用SEREX技术从人卵巢癌cDNA表达文库中筛选所获得新的肿瘤抗原基因（OVA66），基因位于人染色体8q23.3，编码583个氨基酸，分子量为66kD，等电点为4.80。主要位于细胞核和胞浆中，在肿瘤细胞（组织）呈特征性高表达，并能激化机体产生相应抗体。构建OVA66基因真核表达载体和特异shRNA表达干扰载体，分别转染低表达或高表达OVA66基因细胞，发现细胞出现一系列形态学和生物学特征变化，证实该基因具有促进细胞增殖、转移和抑制凋亡作用，表明该基因与肿瘤发生、发展和转移密切相关。制备纯化的OVA66蛋白抗原和抗体建立ELISA法，检测结果显示，正常人和肿瘤患者血清抗体水平呈显著性差异（P<0.001）, 肿瘤患者中阳性率达40%（44/116）。免疫组化法结果显示，不同肿瘤组织标本OVA66蛋白表达阳性率达81%(34/42)。 经CTL识别的HLA-A2限制性OVA66表位鉴定，发现其特定表位序列（L235）能诱导特异性T细胞分泌INF-γ，激发CTL对特异性肿瘤抗原的免疫应答，为肿瘤辅助诊断和制备肿瘤特异性肽疫苗奠定可靠基础。