前期工作发现内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因中第4内含子的27碱基重复子产生相应的27碱基微核糖核酸(microRNA),并对eNOS的转录和表达有明显的抑制作用。本项目研究的主要目的是进一步阐明该microRNA 对eNOS基因表达调节的分子机制,探讨其对细胞功能的影响。项目主要的研究工作包括用小片段RNA亚克隆技术构建该microRNA高表达质粒,并在血管内皮细胞中表达,观察细胞结构、功能变化;用筛选基因建立microRNA高表达的内皮细胞株, 检测该细胞内27碱基microRNA、eNOS mRNA及其蛋白表达动态变化及其对细胞功能(如细胞增殖)的影响;用链亲和素生物素磁珠分离法从内皮细胞胞浆蛋白和核蛋白中筛选和验证与27碱基microRNA相互作用的蛋白分子AP-1,STAT3和Sp1,并发现这些转录因子在microRNA对eNOS的调节中具有显著的协同作用。该项目的完成进一步明确了27碱基 microRNA对组织细胞功能的影响、提出了"转录因子-microRNAs协同模式"对真核基因表达调节的分子机制新理论
英文主题词endothelial nitric oxide synthase (eNOS); microRNAs; vascular endothelial cell; gene expression; transcription factor