中文摘要：

如何促进神经肌肉损伤后再生和修复是基础和临床医学探讨的重要课题。肌源性干细胞(MDSCs)作为成体干细胞的一种，正日益受到关注，已开始用于骨骼和肌肉等组织的再生研究中。本课题拟从GFP小鼠肌组织中分离纯化MDSCs，应用细胞因子和饲养层细胞共培养等方法将其在体外诱导分化为Schwann Cells(tSCs)，并探讨MDSCs分化的分子与信号转导可能机制；将tSCs移植到神经损伤部位，运用电镜、神经单纤维放电等技术研究供体细胞的分布、转化，及受体神经轴突的再生和功能重建情况。本研究将进一步开拓MDSCs的研究领域，探索成体干细胞分化的内在机制，并为MDSCs在神经肌肉联合损伤后细胞学治疗提供可靠的实验理论基础。

结论摘要：

如何促进神经肌肉损伤后再生和修复是临床医学探讨的重要课题。已有报道雪旺氏细胞移植能促进外周神经损伤后的修复再生，但由于正常雪旺细胞来源和培养速度的限制，距离临床应用还有很大距离。本课题拟从体内丰富的肌肉组织中分离和培养肌源干细胞（MDSCs），并进一步诱导分化成为雪旺氏细胞，为外周神经肌肉损伤后的组织工程修复打下实验基础。课题中成功应用改良的差速贴壁法分别完成小鼠及人体眼轮匝肌中肌源干细胞分离培养与鉴定，获得能够持续自我更新的干细胞群，应用有限稀释技术培养获得干细胞单细胞克隆和亚克隆集落，并通过免疫荧光染色证实其表面特异的肌源干细胞标记物Desmin、Sca-1阳性。成功应用雪旺细胞条件培养液体外定向诱导小鼠及人源性肌源干细胞分化为雪旺细胞，并通过对其表面S100、GFAP和P75的表达水平检测，表明此种方法可以获得数量相对稳定的雪旺氏细胞。在动物小鼠坐骨神经切断缺损模型上，进行了细胞移植促进神经修复的体内实验，分别向切断坐骨神经近端神经束膜内注射不同浓度的经肌源干细胞诱导的雪旺氏细胞悬液，发现诱导的雪旺氏细胞悬液能显著促进坐骨神经的修复和再生，且从术后2周时神经再生速度较对照组显著加快。另外我们对肌源干细胞诱导分化为雪旺细胞的影响调控机制以及体内影响雪旺细胞存活的营养因子SMDF（感觉及运动神经来源的NRG1）的表达进行了初步研究。在雪旺细胞的培养液中检测到5种主要的神经营养因子，通过对不同的神经生长因子组合诱导肌源干细胞发现，T-3、IGF-2、PDGF组合可以诱导肌源干细胞的分化，还可以维持诱导所得雪旺氏细胞的存活，为进一步针对性的提高雪旺细胞的成活提供了实验依据。而根据对小鼠不同组织中的SMDF蛋白含量的检测发现，背根神经节中SMDF的含量比较丰富，利用小鼠的背根神经提取物以RT-PCR的方法克隆得到SMDF全长基因序列，并进一步构建pEGFP-N2-SMDF重组载体并成功转染入培养的肌源干细胞中，构建出SMDF转基因MDSCs克隆，该细胞在体外成功能高表达SMDF蛋白， SMDF转基因MDSCs可作为干细胞移植治疗外周神经损伤的理想种子细胞。