中文摘要：

本项目拟采用200μg P257-81多肽诱导实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠模型，将经过脑源性神经营养因子(BDNF)处理的雪旺细胞(SCs)分别在急性期（致敏后第14天）和慢性期（致敏后第28天）进行移植，比较单独SCs移植和BDNF处理的SCs移植在EAN急性期和慢性期的作用。主要从神经修复和免疫学角度探讨其作用机制，包括检测大鼠T细胞功能，淋巴结细胞和血清中细胞因子类型及含量，周围神经脱髓鞘、轴突崩解的修复情况和炎性细胞浸润类型、数量及凋亡情况，周围神经粘附分子、趋化因子及神经营养因子的表达情况等。在荧光显微镜下观察移植后SCs存活、分化、迁徙情况，考察植入细胞与神经根及周围神经是否整合良好，是否具有正常生理功能，而无成瘤倾向，探讨这是否能成为EAN的一种新型治疗方法，为EAN的治疗开辟新道路，为GBS的细胞移植治疗奠定实验理论基础。

结论摘要：

目的 研究脑源性神经营养因子（BDNF）辅助雪旺细胞（SCs）治疗实验性自身免疫性神经炎（EAN）的效果。 方法 原代培养SCs，加入不同浓度BDNF，通过检测细胞增殖活力和上清液中神经生长因子（NGF）及成纤维细胞生长因子（FGF）水平判断BDNF的最佳刺激浓度。用P2(57-81)多肽和弗氏完全佐剂的混合乳液免疫Lewis大鼠建立EAN模型，在致敏第14天经小脑延髓池注射荧光染料CFSE标记的SCs或经BDNF处理的SCs，致敏第45天作为研究终点。致敏后每日对大鼠进行临床评估；分别于致敏第25、35、45天处死部分大鼠，取其坐骨神经，观察荧光标记细胞的迁移情况，进行HE、Luxol-fast-Green及免疫组化染色，评价炎性细胞浸润及脱髓鞘情况；Real time-PCR法检测坐骨神经CD11a、CCL3、NGF及S-100 mRNA表达情况；致敏第45天处死的大鼠同时取腹股沟淋巴结，测定淋巴细胞培养液上清细胞因子含量。结果 BDNF终浓度为50ng/mL时SCs的增殖及分泌能力最高。移植的SCs能向脱髓鞘神经组织迁移。SCs+BDNF移植组与EAN模型组比较致敏第45天瘫痪分值降低；致敏第25及35天炎症细胞浸润、CD4、CD8、CD68、CD54及CD11a阳性细胞数均减少；致敏第35及45天髓鞘脱失程度减轻；各时间点S-100阳性细胞数均增多，而NGF的阳性细胞数均减少；致敏第25天NGF的mRNA表达量明显减低，而S-100的mRNA表达量明显增高；致敏第35天CCL3的mRNA表达量明显减低；致敏第45天CD11a、CCL3及NGF的mRNA表达量明显减低，而S-100的mRNA表达量明显增高，淋巴细胞培养液上清IFN-γ水平明显降低，而IL-10及TGF-β1水平明显增高。SCs移植组与EAN模型组比较各时间点各指标差异均无统计学意义。结论 BDNF对离体培养的SCs增殖和分泌功能有促进作用，终浓度为50ng/mL时SCs的活力最佳。经小脑延髓池植入的SCs细胞可迁徙到坐骨神经。应用与BDNF共培养的SCs移植治疗EAN有效，提示BDNF可辅助SCs发挥治疗作用。机制可能涉及抑制炎症细胞浸润、减轻髓鞘脱失、促进髓鞘再生、促进周围神经组织表达S-100及降低NGF应激性增高、抑制促炎性因子及促进抑炎性因子释放等通路发挥作用。