自SD乳鼠坐骨神经取材,优化培养方法,原代培养、纯化和鉴定雪旺细胞。通过应用吡咯喹啉醌刺激体外培养的雪旺细胞,MTT法观察其促细胞增殖效应,优化出适于体外增殖培养雪旺细胞的吡咯喹啉醌最宜作用浓度及最佳持续作用时间。流式细胞技术检测细胞周期时相分布及凋亡率,RT-PCR法检测细胞周期蛋白mRNA改变;蛋白免疫印记法检测吡咯喹啉醌对雪旺细胞内增殖细胞核抗原及转录调控蛋白的影响。分别采用特异性PKA、PKC及PI3K/AKt 通路抑制剂阻断相应信号通路,检测细胞增殖下游信号分子(P-CREB)的表达量改变。通过上述手段优化出最佳培养条件,利用吡咯喹啉醌高效增殖培养雪旺细胞,并阐明其促雪旺细胞增殖效应通过PKC及PI3K/AKt信号通路进行。本研究为吡咯喹啉醌在脊髓及周围神经组织工程学中的应用奠定前期工作基础。
英文主题词Pyrroloquine quinone; Schwann cell; Proliferation; Culture